槲皮素體外逆轉(zhuǎn)K562-ADM細(xì)胞耐藥的研究.pdf

1、目的：以人紅白血病多藥耐藥細(xì)胞系K562/ADM為研究對(duì)象，觀察經(jīng)槲皮素逆轉(zhuǎn)后，K562/ADM對(duì)阿霉素敏感性的變化，并闡述其作用機(jī)制。 方法：1、實(shí)驗(yàn)組為下列幾組：①K562/ADM耐藥細(xì)胞組。②阿霉素+K562/ADM耐藥細(xì)胞組。③槲皮素+K562/ADM耐藥細(xì)胞組。④槲皮素+ADM+K562/ADM耐藥細(xì)胞組。 2、以噻唑藍(lán)MTT法檢測(cè)K562/ADM細(xì)胞的耐藥性，觀察經(jīng)槲皮素逆轉(zhuǎn)后，阿霉素對(duì)K562/ADM細(xì)胞的

2、抑制率、IC50、逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及K562/ADM對(duì)阿霉素敏感性變化，評(píng)價(jià)槲皮素對(duì)耐阿霉素K562細(xì)胞逆轉(zhuǎn)效果； 3、以AO-EB熒光染色法根據(jù)AO、EB熒光染色劑與不同生長(zhǎng)狀態(tài)細(xì)胞結(jié)合不同，雙染阿霉素作用下K562/ADM細(xì)胞，觀察槲皮素逆轉(zhuǎn)后K562/ADM細(xì)胞在熒光顯微鏡下顏色及生長(zhǎng)形態(tài)，根據(jù)細(xì)胞在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)不同顏色數(shù)目及生長(zhǎng)形態(tài)改變，評(píng)價(jià)經(jīng)槲皮素逆轉(zhuǎn)后，阿霉素對(duì)K562/ADM細(xì)胞細(xì)胞毒作用的變化，槲皮素對(duì)K562/AD

3、M細(xì)胞逆轉(zhuǎn)效果； 4、以化學(xué)比色法測(cè)定經(jīng)阿霉素作用下經(jīng)槲皮素逆轉(zhuǎn)后K562/ADM細(xì)胞內(nèi)GST活力值，觀察K562/ADM在槲皮素逆轉(zhuǎn)后細(xì)胞內(nèi)GST活力變化特點(diǎn)，并以GST介導(dǎo)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)能力、與細(xì)胞內(nèi)與藥物代謝相關(guān)物質(zhì)解毒功能發(fā)生改變等為出發(fā)點(diǎn)，探討槲皮素逆轉(zhuǎn)機(jī)制，旨在為臨床逆轉(zhuǎn)MDR提供新的策略及理論依據(jù)。 結(jié)果：1、MTT實(shí)驗(yàn)中：①10umol/L、30umol/L、90umol/L槲皮素對(duì)K562/ADM抑制率分別

4、為：14.409±1.229、22.836±1.110、49.543±2.729，IC50為91.156umol/L。②10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素對(duì)K562/ADM抑制率分別為：16.546±3.624、34.664±2.279、61.089±2.714，IC50為66.338umol/L。③10umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素對(duì)K562/ADM抑制

5、率分別上升到19.973±1.765、38.051±1.988、63.777±0.786。④30umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素對(duì)K562/ADM抑制率分別上升到31.088±0.926、47.003±1.026、72.594±1.447。⑤90umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素對(duì)K562/ADM抑制率分別上升到40.027±1

6、.058、58.253±0.971、81.720±1.345。⑥經(jīng)10umol/L、30umol/L、90umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)后，阿霉素對(duì)K562/ADM的IC50由66.338umol/L分別下降到60.822umol/L、42.938umol/L、23.846umol/L；逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.091、1.545、2.782。 2、AO-EB實(shí)驗(yàn)中：①相同濃度阿霉素作用下，槲皮素逆轉(zhuǎn)后呈現(xiàn)紅色/橘紅色K562/ADM細(xì)胞數(shù)目多

7、于未用槲皮素逆轉(zhuǎn)組，細(xì)胞形態(tài)相對(duì)不規(guī)則、腫脹，細(xì)胞膜較凹陷，染色相對(duì)不均勻。②10umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)組中呈現(xiàn)紅色/橘紅色K562/ADM細(xì)胞數(shù)目少于30umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)組及90umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)組，90umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)組中紅色/橘紅色細(xì)胞數(shù)目最多。 3、GST實(shí)驗(yàn)中：①10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后細(xì)胞內(nèi)GST活力測(cè)定值分別為：81.927±1.781、69.

8、919±2.057、47.154±1.781。②經(jīng)10umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，細(xì)胞內(nèi)GST活力測(cè)定值分別為81.301±3.411、67.209±2.448、44.444±3.359。③經(jīng)30umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，細(xì)胞內(nèi)GST活力測(cè)定值分別為70.894±2.5

9、07、60.163±3.411、35.230±3.197。④經(jīng)90umol/L槲皮素逆轉(zhuǎn)作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，細(xì)胞內(nèi)GST活力測(cè)定值分別為63.415±2.057、52.033±2.057、25.474±3.197。 結(jié)論：1、槲皮素單獨(dú)對(duì)K562/ADM有抑制作用，在相同濃度下，抑制率小于阿霉素。 2、槲皮素能夠逆轉(zhuǎn)K562/ADM對(duì)阿霉素的耐藥，逆轉(zhuǎn)