FGFR1調(diào)控肺鱗癌干性表型的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　肺鱗癌是非小細(xì)胞肺癌的一個(gè)主要亞型，其在肺癌中的占比約為30%。但是與肺腺癌相比，肺鱗癌驅(qū)動(dòng)基因及相應(yīng)靶向治療的研究仍然進(jìn)展有限,其主要治療手段仍然局限于傳統(tǒng)的化療、放療和手術(shù)治療。FGFR1擴(kuò)增是肺鱗癌中的一個(gè)重要的基因改變。但是FGFR1在肺鱗癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能尚不完全清楚。本文將從FGFR1與肺鱗癌細(xì)胞干性表型的相關(guān)性入手，研究FGFR1調(diào)控肺鱗癌細(xì)胞干性表型的分子機(jī)制；并以此為基礎(chǔ)，進(jìn)一步探討在

2、以FGFR1抑制劑治療肺鱗癌的過程中，發(fā)生原發(fā)性耐藥的可能機(jī)制。
　　研究方法及結(jié)果:
　　第一部分我們首先通過無血清培養(yǎng)法，從FGFR1擴(kuò)增的肺癌細(xì)胞株中分離得到了具有干細(xì)胞樣表型的腫瘤球，并通過RT-PCR，流式細(xì)胞術(shù)，裸鼠皮下移植瘤等一系列實(shí)驗(yàn)，研究了腫瘤球與母代細(xì)胞之間在腫瘤細(xì)胞干性表型方面的差異，并證明腫瘤球相對(duì)于母代細(xì)胞有更強(qiáng)的干性表型；其次，我們重點(diǎn)研究了FGFR1在維持FGFR1擴(kuò)增細(xì)胞的干性表型方面所起的作

3、用。我們構(gòu)建了干擾FGFR1的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，并結(jié)合使用FGFR1抑制劑和激活劑處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)抑制FGFR1能削弱腫瘤球的自我更新與增殖能力，減少ALDH+細(xì)胞亞群的比例，降低干性分子標(biāo)志的表達(dá)的相關(guān)性。最后，我們?cè)隗w內(nèi)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn) FGFR1抑制劑能抑制腫瘤球與母代H1581來源的移植瘤的增殖。
　　第二部分我們進(jìn)一步研究了GLI2在維持FGFR1擴(kuò)增細(xì)胞干性表型方面所起的作用。我們構(gòu)建了GLI2干擾的細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)干擾GLI2能抑制

4、腫瘤球的自我更新與增殖，減少ALDH+細(xì)胞亞群的比例，降低干性分子標(biāo)志的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)FGFR1可能通過ERK信號(hào)通路調(diào)控GLI2的分子機(jī)制。干擾FGFR1對(duì)肺鱗癌干細(xì)胞表型的抑制效應(yīng)可被過表達(dá)GLI2所“拯救”。最后，通過對(duì)臨床標(biāo)本及相關(guān)數(shù)據(jù)庫的研究，我們發(fā)現(xiàn)在肺鱗癌中FGFR1與GLI2在表達(dá)層面存在顯著地正相關(guān)。并且FGFR1與GLI2的高表達(dá)與PFS呈負(fù)相關(guān)性。
　　第三部分我們發(fā)現(xiàn)在肺鱗癌組織中，F(xiàn)GFR1、SOX

5、2、GLI2三者在基因拷貝數(shù)層面與轉(zhuǎn)錄譜層面存在相關(guān)性。在H520細(xì)胞中研究了干擾FGFR1能抑制SOX2的表達(dá)，以及干擾 SOX2卻能抑制 GLI2表達(dá)的影響。最后我們研究發(fā)現(xiàn) SOX2高表達(dá)與FGFR1抑制劑耐藥之間存可能存在相關(guān)性。
　　研究結(jié)論：
　　我們研究發(fā)現(xiàn)FGFR1能通過ERK信號(hào)通路調(diào)節(jié)GLI2的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控FGFR1擴(kuò)增細(xì)胞的干性表型及其自我更新的能力。在肺鱗癌組織中，F(xiàn)GFR1與GLI2的表達(dá)呈正相關(guān)