NF-κB-POU2F2-SLIT2-ROBO1信號通路在胃癌轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩102頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、【研究背景和目的】轉(zhuǎn)移是胃癌患者死亡的主要原因,但是對胃癌轉(zhuǎn)移的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍知之有限。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移機制一直是胃癌研究中的熱點,它涉及多個基因、多條信號通路的交互作用。研究發(fā)現(xiàn)那些調(diào)控、連接胃癌轉(zhuǎn)移的多條信號通路的關(guān)節(jié)點,對于理解胃癌轉(zhuǎn)移的分子機制,開發(fā)胃癌轉(zhuǎn)移治療的靶向藥物具有重要意義。轉(zhuǎn)錄因子可參與多種信號通路的調(diào)控。研究表明轉(zhuǎn)錄因子既可以作為癌基因又可以作為抑癌基因發(fā)揮作用,然而它們在胃癌轉(zhuǎn)移中的作用至今仍不清楚。我們發(fā)現(xiàn)了一個在其

2、他類型腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子POU2F2,在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要作用。我們發(fā)現(xiàn) POU2F2在有轉(zhuǎn)移的胃癌中呈高表達,但其在胃癌中異常表達的原因、意義、功能和調(diào)控機制都不清楚。
  【方法】
  1.用 WB的方法檢測 POU2F2在正常胃上皮細胞及不同轉(zhuǎn)移能力的胃癌細胞系中的表達。進一步用免疫組化的方法檢測并分析了有轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移的胃癌及配對癌旁組織中POU2F2的表達,并分析POU2F2的表達與胃癌預(yù)后的關(guān)

3、系。
  2.通過調(diào)控 POU2F2表達,在體外及體內(nèi)分別驗證 POU2F2在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。采用生物信息學方法預(yù)測POU2F2下游可能的結(jié)合位點,并通過CHIP-Seq, EMSA以及雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M行驗證。并在功能學水平進一步驗證其對胃癌轉(zhuǎn)移的影響。
  3.通過文獻回顧,篩選POU2F2上游潛在作用的靶基因。再次通過生物信息學方法預(yù)測該靶基因與POU2F2啟動子區(qū)的可能結(jié)合位點。通過CHIP-Seq,EM

4、SA以及雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞C其相互作用。并且通過調(diào)控 POU2F2和 ROBO1的表達,分別在體外及體內(nèi)檢測該信號通路對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
  4.使用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-218對NF-κB/POU2F2/SLIT2/ROBO1信號通路多個位點的調(diào)控,進而在功能學上檢測其對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
  【結(jié)果】
  1.POU2F2蛋白在正常胃粘膜細胞系GES-1中幾乎不表達。與GES-1細胞相比,雖

5、然低轉(zhuǎn)移潛能的胃癌細胞(MKN28-NM,SGC7901-NM)中的POU2F2蛋白升高了2倍,但在高轉(zhuǎn)移胃癌細胞系SGC7901-M,MKN28-M中POU2F2的表達升高了約9倍。癌旁組織中POU2F2表達的陽性率為4.00%;胃癌組織中,POU2F2表達的陽性率為65.52%,然而僅有6.00%無淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移的胃癌組織中POU2F2表達陽性,而84.97%轉(zhuǎn)移性胃癌組織POU2F2表達陽性。POU2F2在胃癌中表達高于癌旁組織

6、者其腫瘤淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移率高,TNM分期較晚,患者生存期更短。
  2.轉(zhuǎn)染POU2F2 shRNA的SGC7901-M細胞體外遷移、侵襲能力分別下降。裸鼠尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移實驗中,感染POU2F2 shRNA的SGC7901-M細胞在裸鼠的肺轉(zhuǎn)移灶明顯減少。同時轉(zhuǎn)染 POU2F2慢病毒表達載體可恢復細胞的高轉(zhuǎn)移能力。生物信息學預(yù)測ROBO1為POU2F2可能的下游結(jié)合位點。CHIP-Seq,EMSA以及雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M一步

7、證實 POU2F2與 ROBO1基因的啟動子區(qū)相結(jié)合。體內(nèi)及體外功能學實驗分別顯示POU2F2通過ROBO1促進胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。
  3.文獻回顧提示POU2F2可能是NF-κB的下游靶基因。通過生物信息學預(yù)測,并結(jié)合CHIP-Seq,EMSA以及雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實了NF-κB與POU2F2基因啟動子區(qū)的結(jié)合。激活NF-κB可增加POU2F2和ROBO1的表達并在體內(nèi)外均促進胃癌細胞的轉(zhuǎn)移。抑制 NF-κB的活性可看到相反

8、的表型。在 NF-κB激活的條件下,下調(diào) POU2F2的表達可降低 ROBO1的表達水平并使胃癌細胞體內(nèi)外的轉(zhuǎn)移能力隨之減低。用shPOU2F2敲除POU2F2后,再過表達ROBO1可使胃癌細胞恢復體內(nèi)外的轉(zhuǎn)移能力。
  4.雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻鱩iR-218可直接結(jié)合并同時調(diào)控POU2F2, IκK-β和ROBO1。體內(nèi)外功能學實驗顯示上調(diào)miR-218可抑制POU2F2, IκK-β和ROBO1的表達,并抑制胃癌細胞的轉(zhuǎn)

9、移能力;相反,下調(diào) miR-218可引起 POU2F2, IκK-β和ROBO1的表達增高,促進胃癌細胞的轉(zhuǎn)移。于此同時,抑制POU2F2, IκK-β和ROBO1其中任一個的表達可看到類似miR-218過表達的表型;然而通過轉(zhuǎn)染不含有miR-218結(jié)合位點的載體來過表達IKK-β, POU2F2和 ROBO1,可部分逆轉(zhuǎn)因過表達miR-218而產(chǎn)生的抑制胃癌轉(zhuǎn)移的表型。
  【結(jié)論】
  1.POU2F2通過正性調(diào)控ROB

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論