利用“4i”體系建立人類原始態(tài)胚胎干細(xì)胞系及其microRNA表達譜的研究.pdf

1、小鼠胚胎干細(xì)胞（ESCs）依據(jù)來源不同分為來源于囊胚期內(nèi)細(xì)胞團的原始態(tài)(na?ve)胚胎干細(xì)胞和來源于著床后滋養(yǎng)外胚層的始發(fā)態(tài)(primed)胚胎干細(xì)胞。雖然人ESCs分離于囊胚期內(nèi)細(xì)胞團，但其形態(tài)和某些生物學(xué)特性方面卻與小鼠始發(fā)態(tài)（primed）胚胎干細(xì)胞相似。最近，國際上有不同研究組證實，通過在培養(yǎng)體系中添加不同的小分子化合物組合可以將人 primed狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為na?ve狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞，但是探索最佳的小分子化合物組合將

2、人primed狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為na?ve狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞值得我們進一步深入研究。
　　本研究發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)體系中添加糖原合酶激酶3（glycogen synthase kinase3β， GSK3β）抑制劑、促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MEK）抑制劑、氨基酸末端激酶（Jun N-terminal kinase,JNK）抑制劑及絲裂原激活蛋白激酶P38（Silk crac

3、k the original activated protein kinase p38）抑制劑等4個小分子化合物（4i）和白細(xì)胞抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor，LIF）的條件下，可以成功將人類primed狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)換成na?ve狀態(tài)的胚胎干細(xì)胞。該na?ve狀態(tài)的人類胚胎干細(xì)胞表達干細(xì)胞特有的多能性基因，在體內(nèi)外具有向三胚層分化的能力，在傳代20代后仍保持正常的核型。轉(zhuǎn)化后的 na?ve狀態(tài)的人類

4、胚胎干細(xì)胞能進行單細(xì)胞傳代，且兩條 X染色體都恢復(fù)了活性。通過microRNA表達譜進行芯片檢測時發(fā)現(xiàn)，na?ve與 primed狀態(tài)的人胚胎干細(xì)胞microRNA表達具有明顯的差異。
　　通過生物信息學(xué)分析，我們挑選出具有顯著差異表達的調(diào)控na?ve狀態(tài)相關(guān)基因的靶標(biāo)microRNA進行RT-PCR驗證，對驗證結(jié)果確有明顯差異的microRNA通過過表達或抑制表達實驗來確證microRNA在人胚胎干細(xì)胞 na?ve狀態(tài)多能性維持