人廢棄胚胎群體培養(yǎng)及胚胎干細胞系的建立.pdf

1、自1998年Thomson實驗室建立首株人胚胎干細胞系以來，全世界范圍內已經(jīng)相繼建立1200多株不同的人胚胎干細胞系。然而，研究者們仍致力于建立新的人胚胎干細胞系，尤其是HLA配型及各種族人群的。人胚胎干細胞在體內外具有自我更新及分化的能力，并且能夠分化成內胚層、外胚層、中胚層的各種組織器官的細胞，使其具有將來進行細胞替代治療的前景。同時，多能性胚胎干細胞的這些特性使其能夠成為研究細胞分化的分子機制及探索正常胚胎發(fā)育過程中混合型藥物對其

2、生物學發(fā)育影響的有效工具。但是，在進行人胚胎干細胞建立的過程中，我們必須面臨的問題是胚胎的來源。自Lerou等報道用體外受精治療中剩余的形態(tài)差、發(fā)育潛能低的胚胎建系成功以來，已經(jīng)有大量的研究者關注于使用廢棄胚胎來進行人胚胎干細胞系的建立，因其能夠避免部分倫理學上的紛爭。但是，我們仍不得不面對的問題是廢棄胚胎的低囊胚形成率及較差的囊胚質量。
　　 目前，有一些報道將胚胎進行群體培養(yǎng)，選擇出最適宜胚胎發(fā)育的空間及密度能夠有效促進胚胎

3、的進一步發(fā)育，從而提高臨床妊娠率。同樣，在動物中（如鼠、羊、牛等）也發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象，分析其原因可能為胚胎之間分泌的一些小分子物質能夠促進胚胎的發(fā)育并提高胚胎的潛能。但是，對于分泌的物質的成分仍不十分清楚?，F(xiàn)在，對于廢棄胚胎進行群體培養(yǎng)并沒有系統(tǒng)完整的報道。本實驗的目的為在固定培養(yǎng)液體積的條件下根據(jù)胚胎的數(shù)量進行分組培養(yǎng)以期說明群體培養(yǎng)對于廢棄胚胎發(fā)育潛能的影響。從而，能夠為體外受精治療中的胚胎培養(yǎng)提供參考。同時，使我們能夠更加有效地利用

4、廢棄胚胎來建立更多的人胚胎干細胞系以供科研使用。
　　 目的:
　　 探討對IVF/ICSI周期中的廢棄胚胎進行群體培養(yǎng)的結果及其對胚胎發(fā)育潛能的影響。利用廢棄胚胎建立人胚胎干細胞系。
　　 方法:
　　 1.收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心體外受精-胚胎移植(invitrofertilizationembryotransfer,IVF-ET)和卵胞漿內單精子顯微注射-胚胎移植(intracytopl

5、asmicsperminjection，ICSI-ET)患者無移植及冷凍價值的廢棄胚胎，均經(jīng)過患者知情同意后用于實驗。將收集到的胚胎按照來源進行分組，并在組內按照單個、兩個、三個及四個群體培養(yǎng)進行分組，在體積固定的培養(yǎng)液中，經(jīng)序貫培養(yǎng)至囊胚。
　　 2.采用機械法分離囊胚的內細胞團，將其種植于小鼠胚胎成纖維細胞的飼養(yǎng)層上，采用機械法反復傳代純化，建立人胚胎干細胞系，并完成鑒定。
　　 結果:
　　 1.本實驗共收

6、集我中心廢棄胚胎1223枚，經(jīng)囊胚培養(yǎng)形成囊胚221枚(18.07％)，其中優(yōu)質囊胚92枚(7.52％)。各組間患者的基本情況無明顯差異。
　　 2.1PN胚胎的囊胚形成率及優(yōu)質囊胚形成率明顯高于2PN胚胎和3PN胚胎(P均＜0.05)。在1PN組，與單個胚胎培養(yǎng)組相比較，兩個及三個胚胎培養(yǎng)的優(yōu)質囊胚形成率增高(P＜0.05)。在2PN組，與單個胚胎培養(yǎng)組相比較，兩個及三個胚胎培養(yǎng)的囊胚形成率增高(P＜0.05)，同時，四個胚胎

7、培養(yǎng)的囊胚形成率低于三個胚胎培養(yǎng)組(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義。與單個胚胎培養(yǎng)組相比較，三個胚胎培養(yǎng)組的優(yōu)質囊胚形成率增高（P＜0.05）。在3PN組，與單個胚胎培養(yǎng)組相比較，三個胚胎培養(yǎng)組的胚胎形成率升高(P＜0.05），與三個胚胎培養(yǎng)組比較，兩個和四個胚胎培養(yǎng)組均降低(P＜0.05)。
　　 3.利用廢棄胚胎形成的囊胚，采用機械法分離內細胞團，將其種植于密度為3.5×105/cm2飼養(yǎng)層上，建立2株人胚胎干細胞系，并完成