人廢棄胚胎群體培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞系的建立.pdf

1、自1998年Thomson實(shí)驗(yàn)室建立首株人胚胎干細(xì)胞系以來(lái)，全世界范圍內(nèi)已經(jīng)相繼建立1200多株不同的人胚胎干細(xì)胞系。然而，研究者們?nèi)灾铝τ诮⑿碌娜伺咛ジ杉?xì)胞系，尤其是HLA配型及各種族人群的。人胚胎干細(xì)胞在體內(nèi)外具有自我更新及分化的能力，并且能夠分化成內(nèi)胚層、外胚層、中胚層的各種組織器官的細(xì)胞，使其具有將來(lái)進(jìn)行細(xì)胞替代治療的前景。同時(shí)，多能性胚胎干細(xì)胞的這些特性使其能夠成為研究細(xì)胞分化的分子機(jī)制及探索正常胚胎發(fā)育過(guò)程中混合型藥物對(duì)其

2、生物學(xué)發(fā)育影響的有效工具。但是，在進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞建立的過(guò)程中，我們必須面臨的問(wèn)題是胚胎的來(lái)源。自Lerou等報(bào)道用體外受精治療中剩余的形態(tài)差、發(fā)育潛能低的胚胎建系成功以來(lái)，已經(jīng)有大量的研究者關(guān)注于使用廢棄胚胎來(lái)進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞系的建立，因其能夠避免部分倫理學(xué)上的紛爭(zhēng)。但是，我們?nèi)圆坏貌幻鎸?duì)的問(wèn)題是廢棄胚胎的低囊胚形成率及較差的囊胚質(zhì)量。
　　 目前，有一些報(bào)道將胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)，選擇出最適宜胚胎發(fā)育的空間及密度能夠有效促進(jìn)胚胎

3、的進(jìn)一步發(fā)育，從而提高臨床妊娠率。同樣，在動(dòng)物中（如鼠、羊、牛等）也發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象，分析其原因可能為胚胎之間分泌的一些小分子物質(zhì)能夠促進(jìn)胚胎的發(fā)育并提高胚胎的潛能。但是，對(duì)于分泌的物質(zhì)的成分仍不十分清楚?，F(xiàn)在，對(duì)于廢棄胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)并沒(méi)有系統(tǒng)完整的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的為在固定培養(yǎng)液體積的條件下根據(jù)胚胎的數(shù)量進(jìn)行分組培養(yǎng)以期說(shuō)明群體培養(yǎng)對(duì)于廢棄胚胎發(fā)育潛能的影響。從而，能夠?yàn)轶w外受精治療中的胚胎培養(yǎng)提供參考。同時(shí)，使我們能夠更加有效地利用

4、廢棄胚胎來(lái)建立更多的人胚胎干細(xì)胞系以供科研使用。
　　 目的:
　　 探討對(duì)IVF/ICSI周期中的廢棄胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)的結(jié)果及其對(duì)胚胎發(fā)育潛能的影響。利用廢棄胚胎建立人胚胎干細(xì)胞系。
　　 方法:
　　 1.收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心體外受精-胚胎移植(invitrofertilizationembryotransfer,IVF-ET)和卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射-胚胎移植(intracytopl

5、asmicsperminjection，ICSI-ET)患者無(wú)移植及冷凍價(jià)值的廢棄胚胎，均經(jīng)過(guò)患者知情同意后用于實(shí)驗(yàn)。將收集到的胚胎按照來(lái)源進(jìn)行分組，并在組內(nèi)按照單個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)及四個(gè)群體培養(yǎng)進(jìn)行分組，在體積固定的培養(yǎng)液中，經(jīng)序貫培養(yǎng)至囊胚。
　　 2.采用機(jī)械法分離囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將其種植于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的飼養(yǎng)層上，采用機(jī)械法反復(fù)傳代純化，建立人胚胎干細(xì)胞系，并完成鑒定。
　　 結(jié)果:
　　 1.本實(shí)驗(yàn)共收

6、集我中心廢棄胚胎1223枚，經(jīng)囊胚培養(yǎng)形成囊胚221枚(18.07％)，其中優(yōu)質(zhì)囊胚92枚(7.52％)。各組間患者的基本情況無(wú)明顯差異。
　　 2.1PN胚胎的囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚形成率明顯高于2PN胚胎和3PN胚胎(P均＜0.05)。在1PN組，與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較，兩個(gè)及三個(gè)胚胎培養(yǎng)的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率增高(P＜0.05)。在2PN組，與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較，兩個(gè)及三個(gè)胚胎培養(yǎng)的囊胚形成率增高(P＜0.05)，同時(shí)，四個(gè)胚胎

7、培養(yǎng)的囊胚形成率低于三個(gè)胚胎培養(yǎng)組(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較，三個(gè)胚胎培養(yǎng)組的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率增高（P＜0.05）。在3PN組，與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較，三個(gè)胚胎培養(yǎng)組的胚胎形成率升高(P＜0.05），與三個(gè)胚胎培養(yǎng)組比較，兩個(gè)和四個(gè)胚胎培養(yǎng)組均降低(P＜0.05)。
　　 3.利用廢棄胚胎形成的囊胚，采用機(jī)械法分離內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將其種植于密度為3.5×105/cm2飼養(yǎng)層上，建立2株人胚胎干細(xì)胞系，并完成