吉蘭-巴雷綜合征患者血清的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：吉蘭.巴雷綜合征（GBS）是一種急性感染性多發(fā)性神經(jīng)病。它是臨床上急性遲緩性癱瘓的常見(jiàn)病因之一。以電生理學(xué)和神經(jīng)病理學(xué)為依據(jù)，吉蘭-巴雷綜合征有兩種主要的類型：急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)神經(jīng)?。ˋIDP）和急性軸索性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)?。ˋMAN）。在北美和歐洲吉蘭-巴雷綜合征的發(fā)病以AIDP為主，神經(jīng)電生理及神經(jīng)病理檢查示運(yùn)動(dòng)神經(jīng)脫髓鞘而在中國(guó)和日本相當(dāng)多的吉蘭-巴雷綜合征患者以AMAN發(fā)病，神經(jīng)電生理及神經(jīng)病理檢查示運(yùn)動(dòng)神經(jīng)軸索變性。GBS

2、病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為它是一種自身免疫性疾病。病原微生物和神經(jīng)細(xì)胞抗原的交叉反應(yīng)性及抗神經(jīng)節(jié)抗體的存在部分解釋了吉蘭-巴雷綜合征的發(fā)病機(jī)制。而吉蘭-巴雷綜合征的分子學(xué)發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前缺乏有效的可靠的疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記。吉蘭-巴雷綜合征患者血液、腦脊液中存在與發(fā)病有關(guān)的抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子等，近來(lái)以血漿交換療法及大劑量免疫球蛋白治療本病，臨床證明有效。新近出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是生命科學(xué)進(jìn)入后基因組時(shí)代的標(biāo)志之一。蛋白

3、質(zhì)組是指“由一個(gè)細(xì)胞或組織的基因組所表達(dá)的全部相應(yīng)的蛋白質(zhì)”。蛋白質(zhì)是基因功能活動(dòng)的最終執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象復(fù)雜性和多變性的直接體現(xiàn)者，只有從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度對(duì)所有蛋白質(zhì)的總和進(jìn)行研究，才能更加貼近對(duì)生命現(xiàn)象和本質(zhì)的掌握，生命活動(dòng)的本質(zhì)和活動(dòng)規(guī)律才能找到答案。蛋白質(zhì)組學(xué)可以比較兩個(gè)或更多的樣品之間的蛋白質(zhì)水平，是揭示疾病分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)疾病標(biāo)志性蛋白，尋找新的藥物靶標(biāo)的理想工具。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)及其技術(shù)在人類疾病和臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用與發(fā)展，“臨床

4、蛋白質(zhì)組學(xué)”應(yīng)運(yùn)而生。臨床蛋白質(zhì)組學(xué)通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析可能找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”。血液是取材容易、應(yīng)用廣泛、富含蛋白質(zhì)的研究樣品，其蛋白水平的變化與多種疾病有關(guān)。
　　 本研究擬通過(guò)對(duì)吉蘭-巴雷綜合征患者與對(duì)照者血清的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，通過(guò)定量分析和比較研究在疾病與非疾病狀態(tài)下蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)并鑒定疾病過(guò)程中的可能蛋白質(zhì)，探討吉蘭-巴雷綜合征的分子學(xué)發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：<

5、br>　　 1.研究對(duì)象：在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院就診的GBS患者（依據(jù)Asbury診斷標(biāo)準(zhǔn)）30例和對(duì)照者30例的血液樣本。
　　 2.實(shí)驗(yàn)步驟：將留取的血液樣本離心，取血清置于-80℃冰箱低溫保存；去除高豐度蛋白（以bekman公司去除高豐度蛋白試劑盒去除血清中13種高豐度蛋白）；對(duì)提取的蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳：第一向等電聚焦電泳、第二向垂直SDS-PAGE電泳后、以硝酸銀或考馬斯亮蘭R250顯色；透射掃描雙向電泳凝膠，所得圖

6、譜以ImageMaster 2D Elite軟件進(jìn)行圖像分析；將感興趣蛋白質(zhì)點(diǎn)從考馬斯亮蘭染色的凝膠上切下，膠內(nèi)蛋白質(zhì)酶解；以MALDI-TOF質(zhì)譜或MALDI-TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)檢索對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：吉蘭-巴雷綜合征患者與對(duì)照者的血清對(duì)比，發(fā)現(xiàn)14種蛋白及其它們的亞型或前體有顯著的改變。其中吉蘭-巴雷綜合征患者血清中的上調(diào)蛋白有11種包括：α 1-抗胰凝乳蛋白酶、（肌動(dòng)蛋白）凝溶膠蛋白亞基前體、

7、非復(fù)雜性維生素D結(jié)合蛋白晶體結(jié)構(gòu) 重鏈A、補(bǔ)體成分C4B、人類B 2-糖蛋白1晶體結(jié)構(gòu)（載脂蛋白H）重鏈A、血漿銅藍(lán)蛋白、補(bǔ)體C3c重鏈A、人類補(bǔ)體因子B、人類補(bǔ)體成分C3c重鏈B、α 2-巨球蛋白前體、補(bǔ)體成分1 s亞成分；下調(diào)的蛋白有3種包括：纖溶酶原、載脂蛋白E前體、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白共價(jià)二聚體重鏈A。
　　 結(jié)論：目前，關(guān)于吉蘭-巴雷綜合征患者與對(duì)照者的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。此研究結(jié)論中的14種蛋白也許與吉蘭-巴雷