LOXL2通過催化H3K4去甲基化上調(diào)E-cadherin表達(dá)而促進(jìn)宮頸癌轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：研究賴氨酰氧化酶樣蛋白-2(LOXL2)在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其對(duì)宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，并深入研究與其相關(guān)的分子生物學(xué)作用機(jī)制，篩選出臨床實(shí)用的腫瘤基因診斷標(biāo)志物，尋找更有效的小分子靶向抑制劑，改善宮頸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后。
　　方法：1、采用免疫組織化學(xué)和Real Time RT-PCR的方法檢測(cè)LOXL2及E-cadherin蛋白在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的表達(dá)量。2、運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建

2、穩(wěn)定表達(dá)sh-LOXL2和sh-control基因型的宮頸癌細(xì)胞系。3、通過平板克隆實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)不同表達(dá)量的LOXL2對(duì)宮頸癌C33a細(xì)胞增殖能力的影響。4、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Hela-shLOXL2和Hela-shcontrol細(xì)胞在加順鉑處理和不加順鉑處理時(shí)的細(xì)胞凋亡率，分析LOXL2對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響。5、通過Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)不同表達(dá)量的LOXL2對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。6、采用小鼠原位

3、宮頸癌移植模型來檢驗(yàn)LOXL2的高低表達(dá)對(duì)小鼠宮頸癌組織增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的影響。7、采用染色質(zhì)免疫共沉淀（X-CHIP）技術(shù)來檢測(cè)LOXL2在宮頸癌細(xì)胞中結(jié)合的染色質(zhì)基因片段。8、運(yùn)用Real Time RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)LOXL2、H3K4me1、H3K4me2、H3K4me3、CDH1、E-cadherin、VEGF-C、LYVE1在宮頸癌細(xì)胞中的mRNA和蛋白表達(dá)量。9、運(yùn)用小鼠原位宮頸癌移植模型來檢測(cè)

4、AB0023和青霉胺是否能抑制LOXL2的生物學(xué)效應(yīng)，改善患病小鼠的遠(yuǎn)期預(yù)后。
　　結(jié)果：1、LOXL2在宮頸癌組織中的表達(dá)量明顯高于正常的宮頸組織，而E-cadherin的表達(dá)量則與其相反；2、高表達(dá)的LOXL2能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的過度增殖，并增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力；3、高表達(dá)的LOXL2顯著增加了小鼠原位宮頸癌模型的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率；4、CHIP測(cè)序結(jié)果證實(shí)LOXL2結(jié)合在CDH1基因啟動(dòng)子區(qū)域的近端；5、LOXL2通過催

5、化H3K4me3去甲基化，抑制CDH1基因的表達(dá)，誘發(fā)EMT；上調(diào)Akt通路中VEGF-C的表達(dá)，促進(jìn)血管和淋巴管的生成，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處侵襲和轉(zhuǎn)移；6、特異性LOXL2單克隆抗體AB0023通過靶向抑制LOXL2，改善小鼠原位宮頸癌模型的遠(yuǎn)期預(yù)后。
　　結(jié)論：LOXL2在宮頸癌組織中異常高表達(dá)，通過催化組蛋白H3K4me3過度去甲基化，破壞H3K4甲基化與去甲基化之間的平衡，改變?nèi)旧|(zhì)基因結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，促使某些癌基因或