去甲基化對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞中BLU基因及HPV表達(dá)的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)甲基化抑制劑處理前后宮頸癌Hela細(xì)胞增殖、BLU、HPVE6mRNA表達(dá)的變化，初步研究BLU基因在宮頸癌細(xì)胞中的甲基化狀況及其去甲基化在宮頸癌發(fā)病中的作用。 方法：用不同濃度5-Aza-CdR干預(yù)Hela細(xì)胞株3d后，采用RT-PCR檢測(cè)BLUmRNA、HPVE6表達(dá)的變化；四唑氮藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)Hela細(xì)胞增殖變化情況。 結(jié)果：(1)凝膠圖像分析儀分析RT-PCR產(chǎn)物：實(shí)驗(yàn)組5-Aza-CdR(終濃

2、度分別為5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用Hela細(xì)胞3d前后，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組BLUmRNA/β-actin分別為0.170±0.023、0.404±0.016、0.599±0.015、0.038±0.004，隨著5-Aza-CdR濃度的升高，其表達(dá)隨之增加，經(jīng)方差分析對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間差異具有顯著性(F=701.430，P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組HPV18E6mRNA/β-actin分別為0.381±0.0

3、18、0.382±0.016、0.392±0.025、0.378±0.026，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組數(shù)據(jù)之間差異無(wú)顯著性(F=0.221，P>0.05)，即5-Aza-CdR干預(yù)前后，HPV18E6mRNA表達(dá)無(wú)明顯改變。 (2)經(jīng)終濃度分別為51μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的5-Aza-CdR處理HeLa細(xì)胞3d后，MTT檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活力(A490值)分別為0.490±0.022、0.403±0.017、0.

4、294±0.017，與對(duì)照組細(xì)胞活力(0.592±0.021)比較有明顯差異(F=2659.17，P<0.05)。在所檢測(cè)的濃度范圍內(nèi)隨著5-Aza-CdR濃度的增加，對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖抑制隨之增強(qiáng)，呈量一效關(guān)系(相關(guān)度比較R=-0.976，P<0.05)。 (3)5-Aza-CdR處理前后Hela細(xì)胞形態(tài)學(xué)出現(xiàn)以下改變：倒置顯微鏡下觀察，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞伸展、透亮，呈不規(guī)則對(duì)角形，隨時(shí)間推移，細(xì)胞漸增多，細(xì)胞接觸