NPM1突變通過上調(diào)H3K79甲基化促進(jìn)造血細(xì)胞增殖.pdf

1、目的：白血病是最為常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其中急性髓系白血病(AcuteMyeloid Leukemia，AML)約占所有白血病的59％，其發(fā)病機(jī)理尚不十分清楚。目前的研究表明基因突變和蛋白質(zhì)的異常表達(dá)在白血病發(fā)病過程中扮演重要角色。NPM1基因突變?cè)诩毙运柘蛋籽≈姓?5～30％，目前發(fā)現(xiàn)NPM1突變?cè)谠煅?xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要的作用。先前的研究表明，NPM1突變(NPMc+)基因的白血病細(xì)胞具有特殊的基因表達(dá)特征，如HOX家

2、族基因、MEIS1基因在突變系統(tǒng)中顯著高表達(dá)，這些基因不僅是引發(fā)白血病的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子，而且是MLL融合蛋白的下游靶點(diǎn)。在攜帶有MLL融合蛋白的AML中，MLL的融合伴侶可以募集DOT1L，對(duì)MLL靶基因的H3K79位點(diǎn)進(jìn)行甲基化，造成這些基因過度活化。然而NPM1突變是否能夠影響組蛋白H3K79甲基化水平還不是很清楚。
　　方法：⑴在急性髓系白血病細(xì)胞系中，利用質(zhì)粒構(gòu)建、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、RNA干擾及Westernblot技術(shù)，檢測(cè)H3K

3、79me1/me2/me3的水平。⑵繁育NPM1突變轉(zhuǎn)基因小鼠，收集了NPM1突變小鼠的骨髓細(xì)胞，分選出Lin-S-ca1+C-kit+(LSK)的造血干祖細(xì)胞，利用Westernblot、免疫熒光、流式等技術(shù)檢測(cè)H3K79甲基化水平，并與正常小鼠相對(duì)應(yīng)的骨髓細(xì)胞比較。⑶用H3K79甲基化酶DOT1L抑制劑EPZ004777和EPZ5676藥物分別處理白血病細(xì)胞系和轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓細(xì)胞，研究DOT1L抑制劑促進(jìn)NPM1突變細(xì)胞凋亡的作用

4、。⑷聯(lián)合DOT1L抑制劑和全反式維甲酸(ATRA)用藥，研究其對(duì)NPM1突變的AML的影響。
　　結(jié)果：①NPM1基因突變的AML細(xì)胞中組蛋白H3K79的甲基化水平增高。②NPM1基因突變可以引起組蛋白H3K79甲基化程度和DOT1L蛋白水平的升高。③DOT1L抑制劑EPZ004777和EPZ5566可以抑制DOLT1蛋白表達(dá)和降低H3K79甲基化水平，從而抑制細(xì)胞NPM1突變細(xì)胞增殖和促進(jìn)其凋亡。④DOT1L抑制劑聯(lián)合ATRA可