GOLPH3、NDRG1在膠質瘤中的表達及對膠質瘤細胞凋亡、增殖相關機制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分：GOLPH3、NDRG1在膠質瘤中的表達及相關性的研究
　　目的：
　　高爾基體磷蛋白3 (GOLPH3:Golgi phosphoprotein 3)被認為是外殼蛋白(coat proteins)的一種，NDRG1(N-myc downstream regulated gene 1)于1997年第一次被分離，在人體正常組織及腫瘤中均存在表達，且同時也被發(fā)現(xiàn)參與了胚胎發(fā)生

2、發(fā)育、細胞生長分化、脂質合成、髓鞘形成、應激反應和免疫功能等多個過程。本實驗研究GOLPH3、NDRG1分別在正常腦組織和人腦膠質瘤組織不同病理級別中的表達，并對其表達情況與膠質瘤病理級別的關系進行研究。
　　方法：
　　本實驗分為正常腦組織組、膠質瘤Ⅱ級組、Ⅲ級組和Ⅳ級組，正常腦組織來自于腦外傷患者需要行顱內(nèi)減壓手術而取得的非壞死的正常腦組織標本。應用Real-time RT-PCR法和Western Blot法檢測34例

3、人腦膠質瘤標本和9例正常腦組織中的GOLPH3和NDRG1的mRNA和蛋白水平，并進行統(tǒng)計學分析;應用免疫組織化學方法檢測9例正常腦組織標本和76例人腦膠質瘤組織標本中的GOLPH3和NDRG1表達情況，并分析兩種基因表達的相關性。
　　結果：
　　1.在人腦膠質瘤組織和正常腦組織中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平均有表達。在人腦膠質瘤中，GOLPH3的mRNA和蛋白的表達水平均高于正常腦組織，且與正常腦組

4、織中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，并隨著膠質瘤的病理級別的增高而增加。而NDRG1的mRNA和蛋白表達量在正常腦組織中表達較低，在人腦膠質瘤Ⅱ級組中最高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，在膠質瘤組織中，隨著病理級別的升高，NDRG1的mRNA和蛋白表達水平逐漸降低。NDRG1的mRNA和蛋白在正常腦組織組和Ⅲ級組、Ⅳ級組中的表達無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在膠質瘤組織中，GOLPH3和NDRG1在mRNA水平和蛋白水平

5、的表達趨勢相反。
　　2.GOLPH3的免疫組化結果顯示，GOLPH3的陽性表達主要位于細胞內(nèi)細胞核旁，相當于高爾基體位置，呈粗大顆粒狀，部分染色為細小顆粒狀，著色彌散存在于細胞質中。GOLPH3在正常腦組織組和膠質瘤組中的陽性表達率分別為22.2％(2/9)、57.9％(44/76)，兩者比較(x=4.124，P＜0.05);Ⅱ級組39.1％(9/23)，Ⅲ級組54.2％(13/24)，Ⅳ級組75.9％(20/29)。這說明GO

6、LPH3蛋白表達陽性率在膠質瘤組織中高于正常腦組織，且隨病理級別增高而升高。
　　NDRG1的免疫組化結果顯示，NDRG1的陽性表達主要位于細胞的細胞質，也有部分表達在細胞膜或細胞的連接部位。NDRG1在正常腦組織組和膠質瘤組中的陽性表達率分別為44.4％(4/9)、46.1％(35/76)，兩者比較(x=0.008，P＞0.05);Ⅱ級組60.9％(14/23)，Ⅲ級組，41.7％(10/24)，Ⅳ級組20.6％(7/29)。在

7、腦膠質瘤組織中，NDRG1蛋白表達陽性率隨病理級別增高呈降低的趨勢。
　　NDRG1和GOLPH3的免疫組化陽性率情況和Western-Blot檢測的蛋白表達趨勢是一致的。
　　結論：
　　1、GOLPH3和NDRG1在正常腦組織和膠質瘤組織中均有表達。在膠質瘤組織中，GOLPH3的表達隨著腫瘤組織病理級別的升高逐漸升高，而NDRG1的表達隨著腫瘤組織病理級別的升高逐漸減低。
　　2、GOLPH3和NDRG1在膠

8、質瘤中的表達呈負相關。
　　第二部分：GOLPH3和NDRG1對腦膠質瘤細胞增殖、凋亡及相關機制的研究
　　目的：
　　探討GOLPH3和NDRG1對膠質瘤細胞凋亡、增殖的影響及兩者之間的關系、可能機制，為膠質瘤治療提供潛在的基因治療分子靶點。
　　方法：
　　1.在膠質瘤細胞U251及U87中，用lipofectamine2000轉染GOLPH3或NDRG1的siRNA，用Polyjet轉染GOLPH3或

9、NDRG1的過表達質粒。
　　2.運用Westem Blot檢測其蛋白表達水平;流式細胞術檢測GOLPH3 siRNA、NDRG1siRNA、GOLPH3過表達質粒及NDRG1過表達質粒對U87、U251細胞凋亡的影響;CCK-8法檢測細胞增殖情況。
　　結果：
　　1.下調(diào)GOLPH3或過表達NDRG1后，膠質瘤U251、U87細胞的凋亡增多，增殖能力下降，過表達GOLPH3或下調(diào)NDRG1后，膠質瘤U251、U87

10、細胞的凋亡減少，增殖能力升高。
　　2.在膠質瘤U251細胞系中下調(diào)GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表達水平明顯增加，過表達GOLPH3后，NDRG1、cleaved-caspase3的蛋白表達水平明顯減少。
　　3.在膠質瘤U251細胞系中下調(diào)NDRG1，GOLPH3的蛋白表達水平變化無統(tǒng)計學意義，cleaved-caspase3的蛋白表達水平減少。
　　結論：
　　1.下調(diào)G