5-脂氧合酶在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及其與膠質(zhì)瘤細胞增殖、凋亡的關系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 本研究通過分析5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)及細胞增殖核抗原Ki-67在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達特點及其相關性,探討5-LOX與膠質(zhì)瘤細胞增殖的關系;通過分析5-LOX的特異性抑制劑AA86l對膠質(zhì)瘤U-251細胞增殖與凋亡的影響,探討M861影響U-251細胞增殖與凋亡的可能機制,為抗5-LOX“靶點”治療膠質(zhì)瘤提供理論依據(jù)。 方法: 收集60例腦膠質(zhì)瘤標本,分為低度惡性膠質(zhì)瘤組

2、(Ⅰ級-Ⅱ級,WHO2000)及高度惡性膠質(zhì)瘤組(Ⅲ級-Ⅳ級,WH0 2000),另設14例腦外傷行減壓術患者非腫瘤腦組織為對照組。應用免疫組織化學和RT-PCR檢測對照組、低度惡性膠質(zhì)瘤組及高度惡性膠質(zhì)瘤組中5-LOX及Ki-67的表達特點,并分析二者相關性。應用5-LOX特異性抑制劑AA861作用于膠質(zhì)瘤U251細胞,根據(jù)培養(yǎng)液中M86l濃度分為25、50及100μmol/L組,對照組中所用培養(yǎng)液不含AA861。倒置相差顯微鏡和透射

3、電鏡觀察細胞凋亡;繪制細胞生長曲線;MTT法檢測細胞抑制率;AO/EB熒光染色測定細胞凋亡;Caspase-3活性檢測試劑盒檢測AA861干預后細胞內(nèi)Caspase-3活性變化。 結(jié)果: 1.5-L,OX蛋白在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達,在膠質(zhì)瘤組的表達顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01);Ki-67蛋白在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達,在膠質(zhì)瘤的表達顯著高于對照組(P

4、<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01):5-LOK蛋白和Ki-67蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達呈正相關(γ=0.875,P<0.01),回歸方程為γ=0.721+0.79X。 2、 5-LOXmRNA在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達,在膠質(zhì)瘤組的表達顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.05);Ki-67mRNA在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達,在膠質(zhì)瘤組

5、的表達顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01); 5-LOXmRNA和Ki-67mRNA在膠質(zhì)瘤中的表達呈正相關(γ=0.781,P<0.01),回歸方程為Y=0.124+0.89X。 3、通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察,AA861可誘導U-251細胞發(fā)生凋亡形態(tài)學變化。 4、細胞生長曲線顯示不同濃度的AA861對U251細胞增殖有明顯的抑制作用,并呈時間與劑量

6、依賴關系;MTT法檢測細胞生長抑制效應顯示,在同一濃度各時間點之間比較,各組之間均有顯著差異(P<0.01),在同一時間點各濃度間比較,除24h,25μMol/L組和50μM0l/L組之間以及25μMol/L組與對照組無顯著差異(P>0.05),其余各組之間均有顯著差異(P<0.01),呈時間與劑量依賴關系。 5、AO/EB熒光染色顯示25、50、100μ mol/LAA861作用后各組的細胞凋亡率,在同一濃度各時間點之間均有顯

7、著差異(P<0.05);在同一時間各濃度間比較,僅24h,25μMol/L組和50μMol/L組之間無顯著差(P>0.05),其余各組均有顯著差異(P<0.05),呈時間與劑量依賴關系。 6、Caspase-3活性檢測試劑盒檢測表明,25、50及100 u mol/L組A405nm值在各時間點均顯著高于對照組(P<0.05);同一時間點不同濃度下,僅在4h時間點25μmol/L組與50μmol/L組之間A40snm值沒有差異性(

8、P>0.05),其余各組的A405nm值比較均具有差異性(P<0.05),A405nm值隨濃度升高而升高;同一濃度下不同時間點,除對照組外,其余各組A405nm值之間具有差異性(P<0.05),A405nm值隨作用時間延長而升高,呈時間劑量依賴效應。 結(jié)論: 1、5-LOX在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達,且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級相關;Ki-67在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達,且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級相關;表明5-LOX及Ki

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