5-脂氧合酶在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 本研究通過分析5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)及細(xì)胞增殖核抗原Ki-67在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其相關(guān)性,探討5-LOX與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系;通過分析5-LOX的特異性抑制劑AA86l對膠質(zhì)瘤U-251細(xì)胞增殖與凋亡的影響,探討M861影響U-251細(xì)胞增殖與凋亡的可能機(jī)制,為抗5-LOX“靶點(diǎn)”治療膠質(zhì)瘤提供理論依據(jù)。 方法: 收集60例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,分為低度惡性膠質(zhì)瘤組

2、(Ⅰ級-Ⅱ級,WHO2000)及高度惡性膠質(zhì)瘤組(Ⅲ級-Ⅳ級,WH0 2000),另設(shè)14例腦外傷行減壓術(shù)患者非腫瘤腦組織為對照組。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和RT-PCR檢測對照組、低度惡性膠質(zhì)瘤組及高度惡性膠質(zhì)瘤組中5-LOX及Ki-67的表達(dá)特點(diǎn),并分析二者相關(guān)性。應(yīng)用5-LOX特異性抑制劑AA861作用于膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,根據(jù)培養(yǎng)液中M86l濃度分為25、50及100μmol/L組,對照組中所用培養(yǎng)液不含AA861。倒置相差顯微鏡和透射

3、電鏡觀察細(xì)胞凋亡;繪制細(xì)胞生長曲線;MTT法檢測細(xì)胞抑制率;AO/EB熒光染色測定細(xì)胞凋亡;Caspase-3活性檢測試劑盒檢測AA861干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性變化。 結(jié)果: 1.5-L,OX蛋白在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá),在膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01);Ki-67蛋白在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá),在膠質(zhì)瘤的表達(dá)顯著高于對照組(P

4、<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01):5-LOK蛋白和Ki-67蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.875,P<0.01),回歸方程為γ=0.721+0.79X。 2、 5-LOXmRNA在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá),在膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.05);Ki-67mRNA在對照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá),在膠質(zhì)瘤組

5、的表達(dá)顯著高于對照組(P<0.01);在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01); 5-LOXmRNA和Ki-67mRNA在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.781,P<0.01),回歸方程為Y=0.124+0.89X。 3、通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察,AA861可誘導(dǎo)U-251細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)學(xué)變化。 4、細(xì)胞生長曲線顯示不同濃度的AA861對U251細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用,并呈時間與劑量

6、依賴關(guān)系;MTT法檢測細(xì)胞生長抑制效應(yīng)顯示,在同一濃度各時間點(diǎn)之間比較,各組之間均有顯著差異(P<0.01),在同一時間點(diǎn)各濃度間比較,除24h,25μMol/L組和50μM0l/L組之間以及25μMol/L組與對照組無顯著差異(P>0.05),其余各組之間均有顯著差異(P<0.01),呈時間與劑量依賴關(guān)系。 5、AO/EB熒光染色顯示25、50、100μ mol/LAA861作用后各組的細(xì)胞凋亡率,在同一濃度各時間點(diǎn)之間均有顯

7、著差異(P<0.05);在同一時間各濃度間比較,僅24h,25μMol/L組和50μMol/L組之間無顯著差(P>0.05),其余各組均有顯著差異(P<0.05),呈時間與劑量依賴關(guān)系。 6、Caspase-3活性檢測試劑盒檢測表明,25、50及100 u mol/L組A405nm值在各時間點(diǎn)均顯著高于對照組(P<0.05);同一時間點(diǎn)不同濃度下,僅在4h時間點(diǎn)25μmol/L組與50μmol/L組之間A40snm值沒有差異性(

8、P>0.05),其余各組的A405nm值比較均具有差異性(P<0.05),A405nm值隨濃度升高而升高;同一濃度下不同時間點(diǎn),除對照組外,其余各組A405nm值之間具有差異性(P<0.05),A405nm值隨作用時間延長而升高,呈時間劑量依賴效應(yīng)。 結(jié)論: 1、5-LOX在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達(dá),且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級相關(guān);Ki-67在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達(dá),且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級相關(guān);表明5-LOX及Ki

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