5-脂氧合酶在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的： 本研究通過(guò)分析5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase，5-LOX)及細(xì)胞增殖核抗原Ki-67在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其相關(guān)性，探討5-LOX與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系；通過(guò)分析5-LOX的特異性抑制劑AA86l對(duì)膠質(zhì)瘤U-251細(xì)胞增殖與凋亡的影響，探討M861影響U-251細(xì)胞增殖與凋亡的可能機(jī)制，為抗5-LOX“靶點(diǎn)”治療膠質(zhì)瘤提供理論依據(jù)。 方法： 收集60例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本，分為低度惡性膠質(zhì)瘤組

2、(Ⅰ級(jí)-Ⅱ級(jí)，WHO2000)及高度惡性膠質(zhì)瘤組(Ⅲ級(jí)-Ⅳ級(jí)，WH0 2000)，另設(shè)14例腦外傷行減壓術(shù)患者非腫瘤腦組織為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和RT-PCR檢測(cè)對(duì)照組、低度惡性膠質(zhì)瘤組及高度惡性膠質(zhì)瘤組中5-LOX及Ki-67的表達(dá)特點(diǎn)，并分析二者相關(guān)性。應(yīng)用5-LOX特異性抑制劑AA861作用于膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)液中M86l濃度分為25、50及100μmol/L組，對(duì)照組中所用培養(yǎng)液不含AA861。倒置相差顯微鏡和透射

3、電鏡觀(guān)察細(xì)胞凋亡；繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞抑制率；AO/EB熒光染色測(cè)定細(xì)胞凋亡；Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)AA861干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活性變化。 結(jié)果： 1.5-L,OX蛋白在對(duì)照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá)，在膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01)；Ki-67蛋白在對(duì)照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá)，在膠質(zhì)瘤的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P

4、<0.01)；在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01)：5-LOK蛋白和Ki-67蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.875，P<0.01)，回歸方程為γ=0.721+0.79X。 2、 5-LOXmRNA在對(duì)照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá)，在膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；在高度惡性膠質(zhì)瘤組的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.05)；Ki-67mRNA在對(duì)照組、膠質(zhì)瘤組均可表達(dá)，在膠質(zhì)瘤組

5、的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；在高度惡性膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)顯著高于低度惡性膠質(zhì)瘤組(P<0.01)； 5-LOXmRNA和Ki-67mRNA在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.781，P<0.01)，回歸方程為Y=0.124+0.89X。 3、通過(guò)倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀(guān)察，AA861可誘導(dǎo)U-251細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)學(xué)變化。 4、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)顯示不同濃度的AA861對(duì)U251細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，并呈時(shí)間與劑量

6、依賴(lài)關(guān)系；MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制效應(yīng)顯示，在同一濃度各時(shí)間點(diǎn)之間比較，各組之間均有顯著差異(P<0.01)，在同一時(shí)間點(diǎn)各濃度間比較，除24h，25μMol/L組和50μM0l/L組之間以及25μMol/L組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，其余各組之間均有顯著差異(P<0.01)，呈時(shí)間與劑量依賴(lài)關(guān)系。 5、AO/EB熒光染色顯示25、50、100μ mol/LAA861作用后各組的細(xì)胞凋亡率，在同一濃度各時(shí)間點(diǎn)之間均有顯

7、著差異(P<0.05)；在同一時(shí)間各濃度間比較，僅24h，25μMol/L組和50μMol/L組之間無(wú)顯著差(P>0.05)，其余各組均有顯著差異(P<0.05)，呈時(shí)間與劑量依賴(lài)關(guān)系。 6、Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)表明，25、50及100 u mol/L組A405nm值在各時(shí)間點(diǎn)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度下，僅在4h時(shí)間點(diǎn)25μmol/L組與50μmol/L組之間A40snm值沒(méi)有差異性(

8、P>0.05)，其余各組的A405nm值比較均具有差異性(P<0.05)，A405nm值隨濃度升高而升高；同一濃度下不同時(shí)間點(diǎn)，除對(duì)照組外，其余各組A405nm值之間具有差異性(P<0.05)，A405nm值隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而升高，呈時(shí)間劑量依賴(lài)效應(yīng)。 結(jié)論： 1、5-LOX在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達(dá)，且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)相關(guān)；Ki-67在腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中均表達(dá)，且與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)相關(guān)；表明5-LOX及Ki