導赤承氣湯治療大腸桿菌致的大鼠急性腎盂腎炎的實驗研究.pdf

1、目的：通過不結扎輸尿管直接膀胱注射大腸桿菌的方法制作大鼠APN(急性腎盂腎炎)模型，觀察各組大鼠腎臟組織以及體溫、尿量、腎重系數(shù)、血常規(guī)、尿常規(guī)、尿細菌培養(yǎng)、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反應蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項指標的變化，從而以實驗的方法探討導赤承氣湯對 APN的影響及其作用機制，以期為中醫(yī)臨床應用和教學提供實驗依據(jù)。急性腎盂腎炎(APN)是由各種病原微生物感染直

2、接引起腎小管、腎間質和腎實質的炎癥。臨床常見畏寒發(fā)熱、惡心嘔吐、尿頻、尿急、尿痛,小腹部的脹痛,腰部疼痛,肋脊角壓痛及叩痛等。其基本的病理特點在于腎盂腎盞黏膜充血水腫,表面膿性分泌物,腎皮質有炎癥病灶,腎小管上皮腫脹、脫落壞死,間有白細胞浸潤等,炎癥愈后有瘢痕形成等，但腎小球一般較少受損。在古醫(yī)籍中雖未見明確的關于 APN的記載,但根據(jù)其臨床有身熱,腹?jié)M,便秘、口干、唇裂,伴見小便涓滴不暢,溺時疼痛,尿色紅赤,時煩渴,舌紅脈數(shù)等癥候，將

3、其歸屬于中醫(yī)“淋證”、“癃閉”、“虛勞腰痛”等范疇。并中醫(yī)從“腎與膀胱相表里”這一體現(xiàn)臟腑相關整體觀的理論出發(fā),將其病機特點概括為“腎虛膀胱熱”。根據(jù)APN的中醫(yī)病機特點，依據(jù)“腎與膀胱相表里”的理論及中醫(yī)藥的現(xiàn)代藥理研究,選用導赤承氣湯對大腸桿菌所致APN大鼠進行實驗研究。導赤承氣湯出自吳鞠通《溫病條辨·中焦篇》第17條:“左脈牢堅，小便赤痛，時煩渴甚，導赤承氣湯主之?！北痉郊茨芡a大便,又能通利小便,可兩解大腸與小腸之邪熱,為“二腸

4、同治”之法。臨床用于陽明腑實兼小腸熱盛證。而小腸熱盛，下注膀胱，小便必涓滴不暢。因此，對于APN可以采用導赤承氣湯甘苦化陰利小便與攻下合法而起到清熱瀉火、利濕通淋的作用。本研究通過觀察大鼠腎臟組織以及體溫、尿量、腎重系數(shù)、血常規(guī)、尿常規(guī)、尿細菌培養(yǎng)、血清白介素-2（IL-2）、血清C反應蛋白（CRP）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項指標的變化，明確導赤承氣湯治療 APN的作用機制，為臨床治療APN

5、和中醫(yī)教學提供實驗依據(jù)。
　　方法：⑴選用健康清潔級雄性SD大鼠28只，體重250±20g，適應性喂養(yǎng)3天，試驗期間自由飲水，進食普通飼料，按照隨機分配原則分為4組：空白組（Normal control group,K=n6）、模型組（Model group,M=n6）、導赤承氣湯組（ Daochichengqi Decoction group,D=n8）、左氧氟沙星組（Levofloxacin Hydrochloride gro

6、up,L=n8），其中除空白組外，其余各組均采用不結扎輸尿管直接膀胱注射大腸桿菌（0.6ml）的方法制作APN大鼠模型，于實驗造模后第5天處死。⑵實驗給藥：四組均在造模后連續(xù)給藥5天，給藥劑量按人與大鼠間藥物折算比例系數(shù)計算得出，D組以4.9g/kg/d導赤承氣湯灌胃，L組以0.06g/kg/d左氧氟沙星灌胃，K組和M組分別給予等量生理鹽水灌胃，每天灌胃給藥一次，給藥容積為8ml/kg/d。⑶指標檢測：每日上午九點，用電子體溫計測量大鼠

7、的肛溫；第4天將老鼠放置于代謝籠中，收集24小時尿量，觀察各組間尿量的變化；處死時稱體重、腎重，用于計算腎重系數(shù)；從腹主動脈取血，檢測大鼠血常規(guī)、血清白介素-2（IL-2）、血清 C反應蛋白（CRP）各項指標的變化；無菌狀況下從膀胱抽取尿液，檢測尿細菌培養(yǎng)、尿常規(guī)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）和分泌型免疫球蛋白（SIgA）各項指標的變化；將縱行切開的左側大部分腎臟組織置于10％多聚甲醛液中固定，脫水，石蠟包埋，行 HE染色，用于

8、光鏡下觀察腎臟結構和變化。
　　結果：①各組大鼠指標檢測結果。體溫的測定結果，與空白組相比，模型組、導赤承氣湯組和左氧氟沙星組造模后體溫都呈上升趨勢，模型組體溫升高最明顯，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與模型組相比，導赤承氣湯組和左氧氟沙星組體溫呈下降趨勢，且左氧氟沙星組體溫下降較明顯，但與導赤承氣湯組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。24小時尿量的測定結果，與空白組相比，模型組、導赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿量都增加，模型組增加

9、的較為顯著，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與模型組相比，導赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿量減少，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。腎重系數(shù)的測定結果，與空白組相比，模型組的左腎重系數(shù)明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。與模型組相比，導赤承氣湯組左/右腎重系數(shù)降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，左氧氟沙星組左/右腎重系數(shù)降低，有高度統(tǒng)計學差異(P<0.01)。但導赤承氣湯組和左氧

10、氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。血常規(guī)的測定結果，白細胞及中性粒細胞的測定結果，與空白組相比，模型組白細胞水平明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。與模型組相比，左氧氟沙星組白細胞及中性粒細胞水平下降，有高度統(tǒng)計學差異(P<0.01)，導赤承氣湯組白細胞及中性粒細胞水平下降，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與導赤承氣湯組相比，左氧氟沙星組白細胞水平下降，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。紅細胞及血紅蛋白的測定結果，與空白組相比，

11、模型組紅細胞及血紅蛋白水平下降，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。但導赤承氣湯組、模型組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。血小板的測定結果，各組間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。尿常規(guī)的測定結果，尿白細胞：與空白組相比，模型組尿白細胞增多，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。與模型組相比，導赤承氣湯組尿白細胞減少，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，左氧氟沙星組尿白細胞減少，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間

12、無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。尿潛血：與空白組相比，模型組尿潛血增多，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。但模型組、導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。尿細菌培養(yǎng)結果，與空白組相比，模型組尿培養(yǎng)陽性率有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。與模型組相比，左氧氟沙星組尿培養(yǎng)陽性率有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，導赤承氣湯組尿培養(yǎng)陽性率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。尿SIgA

13、的測定結果，與空白組相比，模型組尿SIgA水平降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。與模型組相比，導赤承氣湯組和左氧氟沙星組尿SIgA水平增高，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。與導赤承氣湯組相比，左氧氟沙星組尿SIgA水平較高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。尿NAG酶的測定結果，各組間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。血清IL-2的測定結果，與空白組相比，模型組IL-2水平增高，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與模型組相比，中藥組 IL-2水

14、平降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。CRP的測定結果，與空白組相比，模型組CRP水平增高，有高度統(tǒng)計學差異(P<0.01)。與模型組相比，導赤承氣湯組 CRP水平降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，左氧氟沙星組 CRP水平也降低，有高度統(tǒng)計學差異(P<0.01)。但導赤承氣湯組和左氧氟沙星組之間無顯著差異(P>0.05)。②空白組大鼠腎組織結構完整，未見病理改變；模型組大鼠腎

15、盂粘膜下及間質區(qū)可見到大量淋巴細胞灶性浸潤,間質區(qū)毛細血管擴張、充血，腎小管壞死；導赤承氣湯組和左氧氟沙星組腎組織病理變化較模型組明顯改善，大鼠腎盂粘膜下及間質區(qū)少量淋巴細胞灶性浸潤,間質區(qū)毛細血管輕度擴張，腎小管輕度壞死，血管輕度充血。
　　結論：⑴導赤承氣湯能升高APN大鼠分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平，降低血中白細胞及中性粒細胞（WBC、N）、血清白介素-2（IL-2）、血清C反應蛋白（CRP）、尿白細胞水平,且減輕腎盂

16、粘膜下及間質區(qū)中性粒細胞及淋巴細胞浸潤、毛細血管擴張、充血及間質水腫，有一定的腎保護作用，短期治療效果與左氧氟沙星無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。證明導赤承氣湯對APN具有一定的治療作用。⑵導赤承氣湯對APN的作用機制可能與其清熱利小便通腑而起到抑菌抗炎，增強尿道局部免疫功能的作用有關。⑶實驗研究證實導赤承氣湯是通過抑菌抗炎、增強尿道局部免疫功能發(fā)揮其甘苦化陰利小便和攻下瀉熱作用，從而達到清熱利濕通淋的目的。為中醫(yī)教學及臨床應用提供了