RhoA蛋白小分子抑制劑的活性篩選及其舒張血管作用的研究.pdf

1、目的:擬在前期RhoA蛋白小分子抑制劑HL07號(hào)化合物的基礎(chǔ)上,通過結(jié)構(gòu)優(yōu)化,在細(xì)胞、組織、整體水平篩選出在蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣模型上有舒張作用的化合物,為發(fā)現(xiàn)新的有利于心血管疾病治療的先導(dǎo)化合物提供基礎(chǔ),并為推動(dòng)RhoA相關(guān)通路在疾病病理生理中作用機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。
　　方法:1)人腦血管平滑肌細(xì)胞(thehuman cerebrovascular smooth muscle cells,HBVSMCs)的培養(yǎng),采用

2、G-LISA方法;定量評價(jià)結(jié)構(gòu)優(yōu)化的33個(gè)化合物對溶血磷脂酸(LPA)引起RhoA激活作用的抑制,觀察化合物對RhoA蛋白GTP結(jié)合域競爭性抑制活性;2)采用SD大鼠離體血管條實(shí)驗(yàn)方法觀察化合物HL47/47K、HL79/79K、HL82/82K對預(yù)收縮血管條的張力的影響;3)大鼠SAH-CVS動(dòng)物模型采用視交叉池二次注血法,實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為7組:正常對照組、SAH模型組、SAH模型組+DMSO、SAH模型組+Fasudil、SAH模型組+

3、HL47(L)、SAH模型組+HL47(M),SAH模型組+HL47(H),每組9只,比較各組大鼠基底動(dòng)脈(basilar artery,BA)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及內(nèi)徑周長的差異。
　　結(jié)果:1)細(xì)胞篩選實(shí)驗(yàn)中,33個(gè)結(jié)構(gòu)改造后的化合物中,篩選出3個(gè)小分子抑制劑活性強(qiáng)于HL07(IC50=1.79±0.17μM),分別是HL47(IC50=1.66±0.28μM)、HL79(IC50=1.26±0.13μM)和 HL82(IC50=1.1

4、7±0.19μM);2)血管條組織水平:HL47(IC50=70.90±1.33μM)、HL82(IC50=73.43±2.61μM)對100 nM苯腎上腺素(phenylephrine, PE)預(yù)收縮的離體去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈(thoracic aorta,TA)血管條呈現(xiàn)濃度依賴的明顯舒張作用(P<0.05),且活性均強(qiáng)于HL07(IC50=123.22±8.93μM);HL79(0~180μM)舒張作用微弱;HL47K(IC50=59.

5、92±5.40μM)、HL82K(IC50=66.64±2.32μM)、HL79K(IC50=111.88±15.71μM)較未成鹽時(shí),活性均有不同程度的增強(qiáng),HL79K活性增加最為顯著(P<0.05);3)大鼠SAH-CVS動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中,各組血管內(nèi)徑周長比較:SAH模型組(386.25±11.25μm)較正常對照組(472.50±53.47μm)、SAH模型組+Fasudil(468.83±43.53μm)減小,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P<0.05);SAH模型組與SAH模型組+DMSO(390.93±20.60μm)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);、SAH模型組+HL47(L、M、H)(464.00±50.46μm、475.60±63.79μm、513.42±40.15μm)均較 SAH模型組增大,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與 SAH模型組+Fasudil(468.83±43.53μm)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。SAH模型組+HL47(L)、

7、SAH模型組+HL47(M)、SAH模型組+HL47(H)三組之間相互差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:1)部分經(jīng)過HL07結(jié)構(gòu)改造后的化合物(HL47、HL79、HL82),其抑制LPA對RhoA激活作用的活性有所增強(qiáng);2)HL47/47K、HL82/82K對PE預(yù)收縮的血管條有顯著的舒張作用,且活性均強(qiáng)于HL07,結(jié)果與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)一致;小分子抑制劑的水溶性對其活性有較大的影響;3)HL47對大鼠腦血管痙攣有緩解作用