版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:探討線粒體內(nèi)膜蛋白Mic60過表達(dá)對大鼠內(nèi)耳血管紋邊緣細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用。
方法:(1)取出生0-3天的新生SD大鼠耳蝸外側(cè)壁血管紋組織進(jìn)行原代培養(yǎng),經(jīng)純化后的邊緣細(xì)胞(MCs)在普通光學(xué)顯微鏡及免疫熒光顯微鏡下觀察、鑒定。(2)50Um/ml葡萄糖氧化酶作用邊緣細(xì)胞4hr后誘導(dǎo)MCs氧化應(yīng)激模型,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。(3)免疫熒光及Western Blot觀察Mic60在MCs中的表達(dá)及分布情況。用M
2、Cs感染預(yù)實驗篩選出Mic60-GFP-Ad及GFP-Ad感染邊緣細(xì)胞的合適滴度。(4)將體外培養(yǎng)的原代MCs根據(jù)不同的處理分為四組:C組即未經(jīng)任何處理的對照組;GO組即葡萄糖氧化酶誘導(dǎo)建立的氧化應(yīng)激模型組;Mic60-組即原代培養(yǎng)的MCs轉(zhuǎn)染空載病毒GFP-Ad后再經(jīng)葡萄糖氧化酶誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激模型組;Mic60+組即原代培養(yǎng)的MCs轉(zhuǎn)染Mic60-GFP-Ad后再經(jīng)葡萄糖氧化酶誘導(dǎo)的氧化模型組。(5)流式細(xì)胞儀上檢測各組細(xì)胞內(nèi)的ROS
3、水平,Western Blot檢測Mic60、SOD1、SOD2在MCs中的蛋白水平。
結(jié)果:(1)在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到MCs接種后培養(yǎng)24hr后貼壁生長,單層可融合形成典型的“鋪路石”樣外觀,后期可見數(shù)個細(xì)胞重疊生長形成的“dome”樣結(jié)構(gòu)。在免疫熒光鏡下觀察檢測到MCs上皮細(xì)胞特異性蛋白CK18表達(dá)呈陽性。(2)50Um/ml葡萄糖氧化酶作用邊緣細(xì)胞4hr后,流式細(xì)胞儀上檢測細(xì)胞內(nèi)的ROS水平,發(fā)現(xiàn)實驗組與對照組相比其
4、細(xì)胞內(nèi)的ROS水平顯著上升(p<0.01)。(3)免疫熒光觀察Mic60主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),Western Blot結(jié)果表明Mic60在線粒體內(nèi)表達(dá)。通過MCs感染預(yù)實驗篩選出Mic60-GFP-Ad及GFP-Ad的合適滴度,分別為1.2×107 PFU/ml、1.0×107 PFU/ml。免疫熒光鏡下觀測到腺病毒轉(zhuǎn)染MCs48hr后其表達(dá)較強且細(xì)胞狀態(tài)較好。(4)流式細(xì)胞儀檢測四組離體培養(yǎng)的MCs中ROS的水平,發(fā)現(xiàn)GO組、Mic60-
5、組ROS水平較C組均升高(p<0.01);但Mic60+組與Mic60-組相比較ROS水平顯著降低(p<0.01)。(5)Western Blot檢測各組Mic60、SOD1、SOD2在MCs線粒體中的蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)GO組、Mic60-組Mic60、SOD1、SOD2的蛋白表達(dá)水平較C組略有升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);Mic60+組Mic60、SOD2蛋白水平較Mic60-組顯著升高(p<0.01),但SOD1表達(dá)上升不具有統(tǒng)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- p110α-p-Akt-Foxo3a在大鼠內(nèi)耳血管紋邊緣細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用.pdf
- 線粒體內(nèi)膜蛋白Mitofilin在白癜風(fēng)發(fā)病中作用研究.pdf
- 人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用研究.pdf
- 肝再生增強因子在細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷中的作用研究.pdf
- 尿酸對血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響及其對細(xì)胞的損傷作用.pdf
- DAXX過表達(dá)對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 線粒體Miro1蛋白對無鎂致癇海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用.pdf
- 氧化應(yīng)激反應(yīng)對腎小球足細(xì)胞裂隙膜蛋白podocin的影響.pdf
- 線粒體靶向抗氧化劑Mitoquinone對人精子凍融氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用.pdf
- 白楊素對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用.pdf
- 杜鵑素對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及分子機制研究.pdf
- 尿酸對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激及線粒體功能影響的研究.pdf
- 可變鐵池:細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與心血管疾病.pdf
- 大米蛋白對Wistar鼠DNA損傷及氧化應(yīng)激防護(hù)作用效果的研究.pdf
- 高糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)HMGB1及對氧化應(yīng)激的作用研究.pdf
- 番茄紅素對氟致肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用.pdf
- Grp75對C6細(xì)胞氧化應(yīng)激性損傷的保護(hù)作用.pdf
- 鉛誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞氧化應(yīng)激及線粒體損傷的實驗研究.pdf
- 芍藥苷對晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的干預(yù)作用.pdf
- 亞砷酸鈉對血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷及通心絡(luò)的保護(hù)作用.pdf
評論
0/150
提交評論