尿酸對肝細胞氧化應(yīng)激及線粒體功能影響的研究.pdf

1、目的：探討尿酸對肝細胞氧化應(yīng)激及線粒體功能的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)人肝細胞（L-02），分別加入0、5、10、20、30mg/dL尿酸干預(yù)（0mg/dL為對照組），干預(yù)時間為24、48、72、96h。電鏡觀察肝細胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)。MTT法檢測肝細胞活力。Annexin V-FITC/PI雙染法，流式檢測肝細胞凋亡。試劑盒檢測肝細胞功能指標AST和ALT；DNA損傷指標8-OhdG；線粒體功能指標 SDH、CCO和ATP；氧化應(yīng)激指

2、標MDA、GSH及SOD的水平。DCFH-DA標記，熒光顯微鏡拍照法檢測ROS。Westen blot檢測Nrf2-ARE信號通路下游SOD、GSH和γ-GCS蛋白水平；RT-PCR檢測Nrf2-ARE信號通路下游SOD和GSH的mRNA水平。
　　結(jié)果：1.肝細胞形態(tài)及凋亡：在尿酸為20mg/dL時肝細胞出現(xiàn)形狀不規(guī)則、表面絨毛較少，出現(xiàn)凋亡及壞死細胞；在＞20mg/dL,作用72～96h后肝細胞凋亡率大于對照組（P＜0.05）

3、。2.肝細胞功能及DNA損傷：ALT、AST在尿酸＞20mg/dL,作用72～96h后高于對照組（P＜0.05）；8-OhdG隨尿酸水平增加及作用時間延長呈升高趨勢，30mg/dL尿酸組最高；3.肝細胞氧化應(yīng)激指標：SOD、GSH在尿酸為20mg/dL，作用48～72h后較對照組降低（P＜0.05）；MDA、ROS在尿酸＞20mg/dL，作用96h后較對照組均增大（P＜0.05）。4.肝細胞Nrf2-ARE下游mRNA水平及蛋白的表達：

4、SOD和GSH mRNA水平在尿酸＞10mg/dL，作用48～72h后較對照組降低（P＜0.05）；SOD、GSH和γ-GCS蛋白在尿酸為30mg/dL，作用24、72h后較對照組降低（P＜0.05）；5.線粒體功能指標：ATP、SDH和CCO在尿酸＞10mg/dL,作用24～72h后高于對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：高水平尿酸（＞20mg/dL）可誘導(dǎo)肝細胞形態(tài)改變，肝細胞活力及凋亡增加，并可能通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激加劇對肝細胞