慈濟化癌保生湯對肝癌H22荷瘤小鼠化療后血細胞生成及瘤細胞凋亡相關(guān)因子影響的實驗研究.pdf

1、目的:研究并證實慈濟化癌保生湯(Ciji Hua'ai Baosheng Decoction，CHBD)對肝癌化療后機體整體機能的改善作用，明確慈濟化癌保生湯對肝癌化療后機體血細胞的保護作用、造血相關(guān)因子的生成作用、促腫瘤細胞凋亡作用，為慈濟化癌保生湯在臨床的應(yīng)用提供科學依據(jù)。
　　方法:培養(yǎng)昆明（KM)小鼠肝癌H22細胞，稀釋為2×107/ml，接種于60只小鼠右前腋下，常規(guī)飼養(yǎng)7天后，全部形成皮下移植瘤，以環(huán)磷酰胺(Cyclo

2、phosphamide Tablets and Injections，CTX)200mg/kg劑量，0.2ml/10g小鼠腹腔注射，建立肝癌H22荷瘤小鼠化療后模型，旨在復(fù)制化療藥物產(chǎn)生毒副作用的模型。隨機分組為模型組、CTX組(0.033g)，CHBD高、中、低劑量組(117.00g，58.50g，29.25g)，共5組，每組12只，給予正常飼料、飲水，除模型組以生理鹽水灌注干預(yù)，其他組分別予以不同藥物進行干預(yù)。期間觀察整體生存狀態(tài)，

3、連續(xù)給藥10天，禁食禁水24h后處死，取標本。小鼠稱重，取腫瘤稱取瘤重，計算抑瘤率;取脾臟，計算脾臟指數(shù);外周血細胞檢測;蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin，HE)染色法瘤組織切片，光鏡下觀察瘤組織病理結(jié)構(gòu)改變;運用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測小鼠腫瘤細胞相關(guān)凋亡因子檢測:小鼠B淋巴細胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)

4、相關(guān)X蛋白(Bcl-2assaciated X protein，BAX)、小鼠胱天蛋白酶3(Cysteinyl aspartate specificproteinase，Casp-3)、Bcl-2、小鼠表皮生長因子受體(Epidermal growth factorreceptor, EGFR)的表達及檢血細胞生成相關(guān)因子:脾組織促紅細胞生成素(Erythropoietin，EPO)、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte

5、-macrophagecolony stimulating factor, GM-CSF);運用免疫組化法檢測小鼠左股骨骨髓細胞周期調(diào)節(jié)因子(CyclinD1)的表達。
　　結(jié)果:1.模型組腫瘤增大速度最明顯，CHBD中藥組腫瘤增大速度較緩。不同組都有1-2只小鼠死亡，可能與實驗操作、藥物耐受等因素有關(guān)。CHBD中藥組小鼠體重整體高于CTX組，其中CHBD低劑量組與CTX組比較有差異(P＜0.05）; CHBD中藥組整體抑瘤率不及

6、CTX組，但CHBD高劑量組水平明顯提高;CHBD中藥高、中劑量組的脾臟重量、脾臟指數(shù)高于模型組及CTX組(P＜0.05或P＜0.01);光鏡下CHBD中藥組的瘤組織惡化程度較模型組明顯減輕，細胞破壞程度低于CTX組。
　　2.CHBD中藥組BAX(P＜0.01)及促細胞凋亡的中藥效應(yīng)酶Casp-3的表達量明顯高于模型組(P＜0.05或P＜0.01)，而凋亡抑制基因Bcl-2的表達低于模型組、CTX組(P＜0.05或P＜0.01)

7、; CHBD低劑量組腫瘤組織惡性程度低于模型組，瘤細胞凋亡高于模型組。CHBD中藥組EGFR表達明顯低于模型組(P＜0.05或P＜0.01)、CTX組(P＜0.01)。與模型組(P＜0.05或P＜0.01)、CTX組(P＜0.05）比較，CHBD中藥組CyclinD1蛋白含量明顯降低，高劑量有極顯著的統(tǒng)計學意義，低劑量無統(tǒng)計學意義。
　　3.模型組和CTX組紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)減少數(shù)量較CHBD中藥

8、組而明顯(P＜0.05或P＜0.01);CHBT中藥組高劑量各數(shù)值均明顯高于模型組、CTX組，統(tǒng)計學意義極其顯著(P＜0.01），中、低劑量組與模型組、CTX組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。CHBD中藥組中EPO含量明顯高于模型組、CTX組(P＜0.05或P＜0.01)，其中低劑量組與模型組、CTX組比較有明顯差異性(P＜0.05），而高劑量組、中劑量組具有極顯著的差異性(P＜0.01）。CHBD中藥組GM-C

9、SF含量均較模型組、CTX組高，都具有極其顯著的差異性(P＜0.01）。
　　結(jié)論:CHBD中藥組小鼠整體生存條件優(yōu)于CTX組，對體重、免疫器官重量方面的影響有積極的作用，CHBD中藥組小鼠機體能夠維持平穩(wěn)整體狀態(tài)，能夠促進瘤組織凋亡基因BAX與Casp-3的表達，抑制瘤組織凋亡基因Bel-2、EFGR及瘤細胞增值相關(guān)蛋白CyclinD1蛋白的表達量，明確了CHBD有促腫瘤細胞凋亡作用，促進細胞凋亡相關(guān)因子生成可能是其機制之一。一