他莫昔芬在高糖誘導(dǎo)小鼠腹膜纖維化中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:Wnt/β-catenin信號(hào)通路在高糖誘導(dǎo)小鼠腹膜纖維化進(jìn)程中的作用
　　目的:通過檢測高糖誘導(dǎo)的腹膜纖維化(peritoneal fibrosis; PF) C57BL/6小鼠中Wnt-4、β-catenin及腹膜纖維化相關(guān)標(biāo)志蛋白的表達(dá)，初步探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在C57BL/6小鼠腹膜纖維化進(jìn)程中的作用。
　　方法:16只C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為2組，每組8只:(1)對照(Control

2、)組:不做任何處理;(2)高糖腹透液(Peritoneal dialysis fluid; PDF)組（簡稱PDF組）:每日腹腔注射4.25％高糖腹透液。30天后留取小鼠壁層腹膜組織，光鏡觀察小鼠壁層腹膜形態(tài)學(xué)變化，Western Blot法及冰凍切片免疫熒光組化法測定兩組小鼠腹膜Wnt-4、β-catenin（β-環(huán)聯(lián)蛋白）、E-cadherin（E-鈣黏蛋白）、Basic Cytokeratin（細(xì)胞角蛋白）、COL1A1(Coll

3、agenⅠ，Ⅰ型膠原)、FN(fibronectin;纖連蛋白)等蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)光鏡下Masson染色顯示:對比Control組，PDF組小鼠壁層腹膜厚度明顯增厚(P＜0.05)，且存在大量膠原沉積;(2)免疫熒光組化顯示，與Control組相比，PDF組小鼠壁層腹膜Wnt-4、β-catenin、FN、COL1A1蛋白表達(dá)明顯，而E-adherin、Basic Cytokeratin蛋白表達(dá)下降;(3) Wes

4、ternBlot結(jié)果顯示，對比Control組，PDF組小鼠Wnt-4、β-catenin蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05），而E-cadherin蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:C57BL/6小鼠腹膜纖維化進(jìn)程中Wnt-4、β-catenin表達(dá)升高，提示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路的異常活化可能為高濃度葡萄糖腹透液導(dǎo)致小鼠腹膜發(fā)生纖維化的作用途徑之一。
　　第二部分他莫昔芬對高糖誘導(dǎo)腹膜纖維化小鼠Wnt

5、/β-catenin信號(hào)通路的作用
　　目的:探討他莫昔芬(Tamoxifen，TAM)在高糖誘導(dǎo)C57BL/6小鼠腹膜纖維化進(jìn)程中的作用及其對Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響。
　　方法:24只C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為3組，每組8只:(1)對照(Control)組:不做任何處理;(2)高糖腹透液(PDF)組:每日腹腔注射4.25％高糖腹透液;(3)高糖+他莫西芬(PDF+TAM)組:每日腹腔注射含4.25％高糖

6、腹透液及6μmol/L TAM溶液。30天后留取小鼠壁層腹膜組織，光鏡觀察小鼠壁層腹膜形態(tài)學(xué)變化;冰凍切片免疫熒光組化法及Western Blot法測定三組小鼠腹膜Wnt-4、β-catenin、E-cadherin、Basic Cytokeratin、COL1A1、FN等蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)光鏡下Masson染色顯示:對比Control組，PDF組小鼠壁層腹膜厚度明顯增厚(P＜0.05)，有大量膠原沉積;對比PDF組

7、，TAM組壁層腹膜厚度薄于PDF組(P＜0.05)，膠原沉積明顯減少;(2)免疫熒光組化顯示:對比Control組，PDF組小鼠壁層腹膜Wnt-4、β-catenin、FN、COL1A1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，而E-adherin、Cytokeratin蛋白表達(dá)減弱弱;對比PDF組，TAM組小鼠壁層腹膜Wnt-4、β-catenin、FN、COL1A1蛋白表達(dá)較弱，而E-adherin、Cytokeratin蛋白表達(dá)較強(qiáng);(3) Western

8、Blot結(jié)果顯示，對比Control組，PDF組小鼠壁層腹膜Wnt-4、β-catenin蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，而E-cadherin蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05);對比PDF組，TAM組Wnt-4、β-catenin蛋白表達(dá)降低(P＜0.05)，而E-cadherin蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:他莫昔芬能通過抑制高糖誘導(dǎo)C57BL/6小鼠腹膜中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，減輕