GalectiN-1在胚胎著床過程中對滋養(yǎng)層干細胞分化和侵襲的作用機制研究.pdf

1、研究目的:母體組織與胎兒成分直接接觸的界面是母胎界面，在此界面的有序調(diào)控影響著胚胎著床和妊娠維持。妊娠是一個需要高度精細調(diào)控的生理過程，滋養(yǎng)細胞的增殖和分化的特定時空進程在一定程度上決定了妊娠結局，而子宮內(nèi)膜上皮細胞是滋養(yǎng)細胞首先接觸到的母體細胞，這兩種細胞間的相互對話至關重要。我們課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比早期妊娠丟失的患者半乳糖凝集素-1(Galectin-1，Gal-1)滋養(yǎng)細胞中表達顯著降低，運用滋養(yǎng)層干細胞系(TSC

2、)體外誘導分化，發(fā)現(xiàn)分化關鍵期Gal-1的表達顯著升高，這可能提示Gal-1在早期胎盤發(fā)育過程中發(fā)揮了重要作用。滋養(yǎng)層干細胞系(TSC)與體內(nèi)的滋養(yǎng)層細胞譜系的基因表達模式相似，Ishikawa細胞（IK細胞）也是著床模型中常用的子宮內(nèi)膜上皮細胞系，因此，建立滋養(yǎng)細胞-子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)體系來模擬體內(nèi)胚胎著床過程，以研究在該體系中Gal-1發(fā)揮的作用機制。
　　研究目的:運用小鼠滋養(yǎng)層干細胞與子宮內(nèi)膜上皮細胞共培養(yǎng)模型模擬母胎界面，觀

3、察共培養(yǎng)及子宮內(nèi)膜上皮細胞分泌物對滋養(yǎng)層干細胞的分化、融合、遷移、侵襲情況和Gal-1表達水平的變化，運用外源性Gal-1刺激滋養(yǎng)層干細胞，觀察Gal-1在滋養(yǎng)細胞分化進程中的表達及與相關重要分子的關系，以及Gal-1對滋養(yǎng)細胞遷移、侵襲能力的影響，研究Gal-1在胚胎著床失敗和EPL中的作用機制，為尋求相關治療方法提供理論依據(jù)。
　　研究方法:運用IK-TSC細胞共培養(yǎng)模型和IK細胞分泌物處理TSC，在干細胞培養(yǎng)基及促分化培養(yǎng)基

4、中誘導分化，采用qRT-PCR方法在mRNA水平檢測TSC增殖和分化時產(chǎn)生的各細胞類型標志物和融合標志物，采用細胞劃痕實驗和transwell細胞侵襲實驗來檢測各組TSC遷移和侵襲能力。從mRNA水平和蛋白水平檢測Gal-1在共培養(yǎng)及IK細胞分泌物處理后分化過程中不同階段的表達變化。運用外源性Gal-1處理TSC細胞，采用qRT-PCR方法檢測TSC分化1-7天各細胞類型標志物和融合標志物的mRNA水平，采用細胞劃痕實驗和transwe

5、ll細胞侵襲實驗來檢測各組TSC遷移和侵襲能力。
　　研究結果:1、在促分化培養(yǎng)基中，IK細胞與TSC共培養(yǎng)能促進TSC的分化和融合;在干細胞培養(yǎng)基中，IK細胞與TSC共培養(yǎng)能誘導TSC的分化;
　　2、在促分化培養(yǎng)基中，IK細胞的分泌物處理能促進TSC的分化和融合;在干細胞培養(yǎng)基中，IK細胞的分泌物處理能誘導TSC的分化;
　　3、IK細胞與TSC共培養(yǎng)及IK細胞的分泌物處理，能增強TSC的遷移能力和侵襲能力;

6、>　　4、在促分化培養(yǎng)基中，IK細胞與TSC共培養(yǎng)及IK細胞的分泌物均能增加TSC中Gal-1的表達;
　　5、在促分化培養(yǎng)基中，外源性Gal-1處理能促進TSC的分化和融合;6、外源性Gal-1處理能增強TSC的遷移能力和侵襲能力;
　　研究結論:1、IK與TCS共培養(yǎng)及IK細胞分泌物能誘導并促進TCS的分化和融合。
　　2、IK與TCS共培養(yǎng)及IK細胞分泌物能增強滋養(yǎng)層干細胞的遷移和侵襲能力。
　　3、IK與