GalectiN-1在胚胎著床過(guò)程中對(duì)滋養(yǎng)層干細(xì)胞分化和侵襲的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:母體組織與胎兒成分直接接觸的界面是母胎界面，在此界面的有序調(diào)控影響著胚胎著床和妊娠維持。妊娠是一個(gè)需要高度精細(xì)調(diào)控的生理過(guò)程，滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖和分化的特定時(shí)空進(jìn)程在一定程度上決定了妊娠結(jié)局，而子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞是滋養(yǎng)細(xì)胞首先接觸到的母體細(xì)胞，這兩種細(xì)胞間的相互對(duì)話至關(guān)重要。我們課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比早期妊娠丟失的患者半乳糖凝集素-1(Galectin-1，Gal-1)滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)顯著降低，運(yùn)用滋養(yǎng)層干細(xì)胞系(TSC

2、)體外誘導(dǎo)分化，發(fā)現(xiàn)分化關(guān)鍵期Gal-1的表達(dá)顯著升高，這可能提示Gal-1在早期胎盤發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。滋養(yǎng)層干細(xì)胞系(TSC)與體內(nèi)的滋養(yǎng)層細(xì)胞譜系的基因表達(dá)模式相似，Ishikawa細(xì)胞（IK細(xì)胞）也是著床模型中常用的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞系，因此，建立滋養(yǎng)細(xì)胞-子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)體系來(lái)模擬體內(nèi)胚胎著床過(guò)程，以研究在該體系中Gal-1發(fā)揮的作用機(jī)制。
　　研究目的:運(yùn)用小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)模型模擬母胎界面，觀

3、察共培養(yǎng)及子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞分泌物對(duì)滋養(yǎng)層干細(xì)胞的分化、融合、遷移、侵襲情況和Gal-1表達(dá)水平的變化，運(yùn)用外源性Gal-1刺激滋養(yǎng)層干細(xì)胞，觀察Gal-1在滋養(yǎng)細(xì)胞分化進(jìn)程中的表達(dá)及與相關(guān)重要分子的關(guān)系，以及Gal-1對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響，研究Gal-1在胚胎著床失敗和EPL中的作用機(jī)制，為尋求相關(guān)治療方法提供理論依據(jù)。
　　研究方法:運(yùn)用IK-TSC細(xì)胞共培養(yǎng)模型和IK細(xì)胞分泌物處理TSC，在干細(xì)胞培養(yǎng)基及促分化培養(yǎng)基

4、中誘導(dǎo)分化，采用qRT-PCR方法在mRNA水平檢測(cè)TSC增殖和分化時(shí)產(chǎn)生的各細(xì)胞類型標(biāo)志物和融合標(biāo)志物，采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)各組TSC遷移和侵襲能力。從mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)Gal-1在共培養(yǎng)及IK細(xì)胞分泌物處理后分化過(guò)程中不同階段的表達(dá)變化。運(yùn)用外源性Gal-1處理TSC細(xì)胞，采用qRT-PCR方法檢測(cè)TSC分化1-7天各細(xì)胞類型標(biāo)志物和融合標(biāo)志物的mRNA水平，采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwe

5、ll細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)各組TSC遷移和侵襲能力。
　　研究結(jié)果:1、在促分化培養(yǎng)基中，IK細(xì)胞與TSC共培養(yǎng)能促進(jìn)TSC的分化和融合;在干細(xì)胞培養(yǎng)基中，IK細(xì)胞與TSC共培養(yǎng)能誘導(dǎo)TSC的分化;
　　2、在促分化培養(yǎng)基中，IK細(xì)胞的分泌物處理能促進(jìn)TSC的分化和融合;在干細(xì)胞培養(yǎng)基中，IK細(xì)胞的分泌物處理能誘導(dǎo)TSC的分化;
　　3、IK細(xì)胞與TSC共培養(yǎng)及IK細(xì)胞的分泌物處理，能增強(qiáng)TSC的遷移能力和侵襲能力;

6、>　　4、在促分化培養(yǎng)基中，IK細(xì)胞與TSC共培養(yǎng)及IK細(xì)胞的分泌物均能增加TSC中Gal-1的表達(dá);
　　5、在促分化培養(yǎng)基中，外源性Gal-1處理能促進(jìn)TSC的分化和融合;6、外源性Gal-1處理能增強(qiáng)TSC的遷移能力和侵襲能力;
　　研究結(jié)論:1、IK與TCS共培養(yǎng)及IK細(xì)胞分泌物能誘導(dǎo)并促進(jìn)TCS的分化和融合。
　　2、IK與TCS共培養(yǎng)及IK細(xì)胞分泌物能增強(qiáng)滋養(yǎng)層干細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　3、IK與