Galectin-1在滋養(yǎng)層干細(xì)胞增殖和分化中的表達(dá)與相關(guān)調(diào)控分子的研究.pdf

1、研究背景:妊娠過程中胚胎的植入、胎盤的形成和妊娠維持依賴于有序的滋養(yǎng)細(xì)胞增殖與分化。除胚胎遺傳缺陷等本身因素外，有研究表明胚胎著床失敗和早期妊娠丟失(EPL)等現(xiàn)象與滋養(yǎng)細(xì)胞增殖與分化不良有關(guān)，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞分化不良的機制至今未明。我們實驗室前期的蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)與正常對照組相比EPL患者半乳糖凝集素-1（Galectin-1，Gal-1）滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)顯著降低，這可能提示Gal-1在早期胎盤發(fā)育過程中發(fā)揮了重要作用。滋養(yǎng)層干細(xì)胞系(T

2、SC)與體內(nèi)的滋養(yǎng)層細(xì)胞譜系的基因表達(dá)的模式相似，因此可通過TSC的培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化模擬體內(nèi)的細(xì)胞滋養(yǎng)層形成胎盤的過程，以研究滋養(yǎng)細(xì)胞在妊娠維持中相關(guān)機制。
　　研究目的:運用小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞增殖與分化模型，觀察Gal-1在滋養(yǎng)細(xì)胞增殖-分化進程中的表達(dá)及相關(guān)重要分子的關(guān)系，研究Gal-1在胚胎著床失敗和EPL中的作用機制，為尋求相關(guān)治療方法提供理論依據(jù)。
　　研究方法:培養(yǎng)TSC并誘導(dǎo)其分化。采用qRT-PCR方法在mRNA

3、水平檢測TSC增殖和分化時產(chǎn)生的各細(xì)胞類型標(biāo)志物。從mRNA水平和蛋白水平檢測Gal-1以及相關(guān)TSC融合分子在TSC增殖和分化過程中不同階段的表達(dá)變化。采用亞硫酸鹽測序的方法檢測Gal-1在TSC增殖分化過程中的啟動子的甲基化水平。
　　研究結(jié)果:
　　1、Gal-1在TSC分化3-5天mRNA和蛋白水平表達(dá)相對于干細(xì)胞狀態(tài)顯著升高。第四天mRNA表達(dá)最高，為干細(xì)胞狀態(tài)表達(dá)的2.04倍。
　　2、Gal-1啟動子的甲

4、基化頻率隨分化下降，干細(xì)胞狀態(tài)甲基化頻率約1.4％，之后逐漸下降，至第五天達(dá)到最低，隨后上升至1％。
　　3、TSC分化過程中Gal-1表達(dá)變化與啟動子甲基化頻率呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，Gal-1表達(dá)隨分化上升，至第五天達(dá)到峰值，而甲基化頻率隨分化下降，至第五天達(dá)到最低值。
　　4、Gal-1與細(xì)胞融合關(guān)鍵因子β-catenin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，TSC分化第三天和第四天Gal-1表達(dá)顯著增高時β-catenin表達(dá)顯著降低。
　　研