肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體與食管鱗癌放射敏感性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：食管癌是我國(guó)高發(fā)和導(dǎo)致癌性死亡的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，病理類型以食管鱗狀細(xì)胞癌多見(jiàn)。放射治療，是食管癌治療的基本方法之一。但是由于周圍正常組織耐受劑量的限制，腫瘤組織的劑量往往達(dá)不到最佳照射劑量。探索新的放射治療增敏方法是目前食管癌治療的一大熱點(diǎn)。
　　目前肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(Met)信號(hào)通路與腫瘤的放射的敏感性相關(guān)而得到關(guān)注。Met信號(hào)通路具有多種生物活性，如細(xì)胞增殖、生存、胚胎形成、血管再生、組織損傷修復(fù)。Met信號(hào)通路的激

2、活不僅與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，還參與DNA修復(fù)機(jī)制，進(jìn)而參與放療抵抗的機(jī)制。
　　因此，本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)Met在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，探討Met蛋白表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系，以及放射治療療效的影響。并在體外研究Met抑制劑抑制Met后食管癌細(xì)胞株的生物學(xué)性狀改變，以及聯(lián)合放射線來(lái)明確Met抑制劑能否增加放療敏感性，為食管鱗狀細(xì)胞癌的放射增敏提供新的思路。
　　方法：選取180例ⅡB-ⅢC期食管鱗

3、狀細(xì)胞癌患者石蠟包埋蠟塊進(jìn)行免疫組化檢測(cè)。不同濃度BPI-9016M處理后的Eca109食管癌細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)組，無(wú)藥物處理的Eca109食管癌細(xì)胞株為對(duì)照組。作用48小時(shí)后，用CCK-8比色法檢測(cè)細(xì)胞體外增殖變化;不同濃度BPI-9016M對(duì)Eca109食管癌細(xì)胞株作用48小時(shí)后，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期改變，AnnexinⅤ/PI雙染法檢測(cè)觀察細(xì)胞凋亡變化;BPI-9016M聯(lián)合放射線照射Eca109食管癌細(xì)胞株后，集落形成分析檢測(cè)細(xì)胞

4、體外增殖和生長(zhǎng)變化以及Met抑制劑對(duì)細(xì)胞放射敏感性的影響;定量RT-PCR檢測(cè)不同處理組細(xì)胞中Met基因表達(dá)情況，以及Western Blot分析檢測(cè)Met，P53，Bax，BCl-2，Caspase3，Caspase9，Ercc-1蛋白的表達(dá)差異。應(yīng)用生存曲線計(jì)算總體生存，log-rank檢驗(yàn)檢查生存曲線的差別;Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型用于單因素和多因素的分析。計(jì)量資料應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS21.0軟件。

5、r>　　結(jié)果：1.通過(guò)免疫組化的方法，發(fā)現(xiàn)Met蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中存在表達(dá)差異。Met高表達(dá)和低表達(dá)與患者的預(yù)后顯著相關(guān)（中位生存分別為41.9個(gè)月和56.7個(gè)月，P=0.001）。在行放療的患者中，Met蛋白高表達(dá)與患者的預(yù)后差顯著相關(guān)(P=0.002)。
　　2.CCK-8比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BPI-9016M明顯抑制Eca109食管癌細(xì)胞體外增殖生長(zhǎng)，存在量-效關(guān)系，與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);流式

6、細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，通過(guò)BPI-9016M抑制Met對(duì)Eca109食管癌細(xì)胞各周期細(xì)胞比例影響不大;應(yīng)用AnnexinⅤ/PI雙染法檢測(cè)到Met靶向藥BPI-9016M作用于Eca109食管癌細(xì)胞48h后有不同程度的凋亡發(fā)生，存在量-效關(guān)系，與對(duì)照組相比較具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);Eca109食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)受放射線的影響，放射劑量越大，Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)越受限制，并且Met抑制劑對(duì)Eca109細(xì)胞有放療增敏作用。定量RT-P

7、CR結(jié)果顯示，Eca109食管癌細(xì)胞經(jīng)BPI-9016M處理，聯(lián)合或不聯(lián)合放射線照射，都會(huì)是Met基因表達(dá)下降;Western Blot結(jié)果顯示，Eca109食管癌細(xì)胞經(jīng)BPI-9016M聯(lián)合放射線照射后，會(huì)使激活態(tài)p-Caspase9、激活態(tài)p-Caspase3蛋白上調(diào)，并使Met，Bcl-2，P53，Ercc-1蛋白下調(diào)。
　　結(jié)論：在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中，Met的表達(dá)存在差異性，且與患者的生存及放療敏感性有關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)也顯示