RIPK3依賴的程序性壞死在氣道上皮細(xì)胞損傷中的作用.pdf

1、急性肺損傷（ALI）和其嚴(yán)重形式急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是呼吸科常見(jiàn)急癥之一，可由膿毒癥誘發(fā)。細(xì)菌脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要組分之一，作為革蘭氏陰性細(xì)菌主要致病物質(zhì)的基礎(chǔ)，能在體內(nèi)引起強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。氣道上皮細(xì)胞在啟動(dòng)和維持急性肺損傷(ALI)炎癥反應(yīng)過(guò)程中起著重要作用。急性肺損傷患者氣道上皮細(xì)胞發(fā)生損傷、增生、死亡等改變，損傷或者死亡的氣道上皮細(xì)胞通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，趨化并活化免疫細(xì)胞，啟動(dòng)炎癥反應(yīng)

2、；且氣道上皮細(xì)胞作為屏障結(jié)構(gòu)被破壞，促進(jìn)外來(lái)抗原直接與粘膜下層免疫細(xì)胞接觸，加重炎癥反應(yīng)發(fā)生。Necroptosis，程序性壞死，是一種新近被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞程序性死亡方式，受主要信號(hào)分子RIPK1、RIPK3、MLKL等調(diào)節(jié)。程序性壞死被普遍認(rèn)為是一種高度促炎的細(xì)胞死亡方式，在體內(nèi)多種急慢性炎癥中發(fā)揮重要作用，但是它是否參與急性肺損傷氣道上皮細(xì)胞炎癥目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　探討RIPK3依賴的程序性壞死在急性肺損

3、傷氣道上皮細(xì)胞炎癥中的作用。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)用LPS刺激人氣道上皮細(xì)胞系HBE，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)氣道上皮細(xì)胞發(fā)生程序性壞死的情況，Western-Blot檢測(cè)程序性壞死主要信號(hào)分子表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1.LPS誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞發(fā)生死亡
　　LPS刺激HBE24h，結(jié)果顯示LPS增加HBE死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例（23.90％±1.749%

4、vs9.056%±0.8710%，P＜0.05，n=9）。
　　2.LPS誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞發(fā)生程序性壞死，而不是凋亡或者焦亡（pyroptosis）
　　預(yù)先使用RIPK3抑制劑dabrafenib(Da)處理，氣道上皮細(xì)胞的死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例較直接加LPS刺激明顯減少（16.52%±2.264%vs23.90%±1.749%，P＜0.05，n=9）；預(yù)先使用caspas

5、e泛抑制劑zVAD-fmk(Z)處理，抑制凋亡以及焦亡，氣道上皮細(xì)胞的死亡比例即Annexin V+/PI++Annexin V+/PI-比例與直接加LPS刺激相比沒(méi)有明顯減少（18.53%±2.316%vs22.29%±1.890%，P＞0.05，n=4）。
　　3.RIPK3-MLKL信號(hào)通路在LPS誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞炎癥中的作用
　　LPS能夠促進(jìn)RIPK3作用底物MLKL的活化，即p-MLKL的表達(dá)上調(diào)；RIPK3抑