軟骨細(xì)胞程序性壞死在TMJPTOA發(fā)病中的初步研究.pdf

1、目的：
　　初步研究髁突軟骨細(xì)胞程序性壞死在顳下頜關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用以及濃縮生長因子膜對山羊髁突軟骨缺損的修復(fù)效果。
　　方法：
　　1.臨床收集2012.9~2014.8期間就診于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院口腔外科的髁突骨折患者無法復(fù)位的骨折片段軟骨，體外培養(yǎng)和鑒定原代人髁突軟骨細(xì)胞，并測量其生長曲線。
　　2.Western blotting法及免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測原代人髁突軟骨細(xì)胞中RIP

2、3的表達情況。
　　3.用類似于人TMJ骨關(guān)節(jié)炎時關(guān)節(jié)液中TNF-α濃度20ng/ml，來模擬創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎時關(guān)節(jié)腔中的高濃度TNF-α狀態(tài)，體外誘導(dǎo)原代軟骨細(xì)胞死亡，并分別或聯(lián)合應(yīng)用凋亡抑制劑Z-VAD-FMK或程序性壞死抑制劑Necrostatin-1處理細(xì)胞。用AnnexinⅤ/PI染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的死亡情況，CM-H2DCFDA染色法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS水平，western blotting檢測RIP3的表達水平

3、。
　　4.動物體內(nèi)實驗觀察自體濃縮生長因子CGF對山羊髁突軟骨缺損的修復(fù)效果。
　　結(jié)果：
　　1.本研究采用機械法聯(lián)合酶消化法，獲得了大量具有軟骨細(xì)胞特性和增殖能力的髁突軟骨細(xì)胞，其甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原染色均為陽性，生長曲線呈“S”型。
　　2.原代人髁突軟骨細(xì)胞表達RIP3，且RIP3主要位于細(xì)胞質(zhì)中。
　　3.軟骨細(xì)胞活力與TNF-α之間存在濃度和時間依賴性。用類似于TMJ骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中TNF-

4、α濃度20ng/mL作用24h,細(xì)胞死亡率為（38±7.27）％。聯(lián)合應(yīng)用Z-VAD-FMK和Necrostatin-1可以提高軟骨細(xì)胞在TNF-α誘導(dǎo)下的細(xì)胞存活率，并可降低ROS水平。但是RIP3的表達未見明顯變化。
　　4.CGF可以促進山羊髁突軟骨缺損的修復(fù)，修復(fù)組織可分化為軟骨樣組織和纖維樣組織。CGF還可以減輕關(guān)節(jié)軟骨損傷后的炎癥反應(yīng)和軟骨下骨變性。
　　結(jié)論：
　　髁突軟骨細(xì)胞在TNF-α刺激下會發(fā)生凋亡