Stanford B型主動(dòng)脈夾層患者與正常人miRNA-146差異表達(dá)及相關(guān)危險(xiǎn)因素研究.pdf

1、主動(dòng)脈夾層是一種災(zāi)難性的心血管疾病，近年來(lái)基于人群的研究顯示，急性主動(dòng)脈夾層的發(fā)病率為每10萬(wàn)人2-2.5例，在美國(guó)相當(dāng)于每年6000-10000例患者。主動(dòng)脈夾層病情兇險(xiǎn)，40％患者立即死亡，此后每小時(shí)有1％的患者死亡。手術(shù)期間或術(shù)后短期內(nèi)有5％-20％患者死亡。而且術(shù)后5年僅50％-70％患者存活。雖然夾層的發(fā)生與很多因素相關(guān)，但是自發(fā)性主動(dòng)脈夾層的病因仍不清楚。
　　目前主動(dòng)脈夾層的發(fā)病機(jī)制仍未被完全闡明，但可能相關(guān)的一些誘

2、發(fā)因素，包括遺傳性的主動(dòng)脈中層發(fā)育異常情況，如馬凡氏綜合征(Marfan's syndromes)、埃-當(dāng)綜合征(Ehlers-Danlos syndromes)、Loeys-Dietz綜合征、先天性卵巢發(fā)育不全（Turner綜合征）等;主動(dòng)脈管壁應(yīng)力增高的情況，如高血壓、嗜鉻細(xì)胞瘤、外傷、使用可卡因等;炎癥性血管疾病，如多發(fā)性大動(dòng)脈炎、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、白塞氏動(dòng)脈炎等;其他因素還包括妊娠、多囊腎、長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑等。高血壓是

3、目前明確及醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的主動(dòng)脈夾層的危險(xiǎn)因素，但其他因素仍然未被完全闡明。
　　國(guó)內(nèi)外許多研究都試圖探索主動(dòng)脈夾層的發(fā)病機(jī)制，尤其是在分子遺傳學(xué)方面，認(rèn)為基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)的異常是主動(dòng)脈夾層的發(fā)病基礎(chǔ)。
　　微小核糖核酸(Micro-ribonucleic acids，MicroRNA，miRNA)，因其功能與正?；虮磉_(dá)及心血管疾病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，最近引起了科學(xué)家們的重視。miRNA是一類由大約22個(gè)核苷酸組成的非編碼的小RNA序

4、列，具有高度保守性[17]。其由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成雙鏈RNA，雙鏈miRNA被引導(dǎo)進(jìn)入沉默復(fù)合體中，一條成熟單鏈miRNA保留其中，另一條被降解。miRNA分子通過(guò)與mRNA3'端的非編碼區(qū)(untranslatedregions，UTR)的堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制mRNA的翻譯或降解靶標(biāo)mRNA[18]，從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)水平。本研究的前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)基因芯片

5、掃描分析，與正常人主動(dòng)脈組織相比，主動(dòng)脈夾層患者主動(dòng)脈組織中部分miRNAs呈差異性表達(dá)。因此，本研究收集了B型主動(dòng)脈夾層患者及正常志愿者的臨床資料及外周靜脈血標(biāo)本，嘗試應(yīng)用轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技術(shù)驗(yàn)證miRNA-146在兩者之間的差異表達(dá)，并應(yīng)用Logistic回歸分析方法，納入各項(xiàng)指標(biāo)，探討其與主動(dòng)脈夾層疾病發(fā)生的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，為

6、進(jìn)一步研究主動(dòng)脈夾層的發(fā)病機(jī)制及早期診斷防治提供新的思路。
　　目的：
　　第一部分
　　在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，擴(kuò)大樣本量，收集主動(dòng)脈夾層患者及正常志愿者的外周靜脈血標(biāo)本，應(yīng)用轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技術(shù)驗(yàn)證miRNA-146在兩者之間的差異表達(dá)。
　　第二部分
　　將收集到的主動(dòng)脈夾層患者及正常志愿

7、者的臨床資料，結(jié)合RT-PCR結(jié)果，應(yīng)用Logistic回歸分析方法，納入各項(xiàng)指標(biāo)，探討其與主動(dòng)脈夾層疾病發(fā)生的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，為進(jìn)一步研究主動(dòng)脈夾層的發(fā)病機(jī)制及早期診斷防治提供新的思路。
　　方法：
　　第一部分
　　經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意，收集2014年在廣東省人民醫(yī)院心血管病研究所心內(nèi)科住院的Stanford B型主動(dòng)脈夾層患者的外周靜脈血標(biāo)本43例，并按照性別、年齡、是否合并冠心病、糖尿病、心血管病家族史

8、及肝功能與病例組匹配的原則，入選排除主動(dòng)脈夾層、重大心血管系統(tǒng)疾病及腫瘤的志愿者外周靜脈血標(biāo)本36例作對(duì)照。所有研究對(duì)象均留取10ml血液標(biāo)本，裝入EDTA管中，后放入-80℃冰箱保存。采用RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證夾層患者與對(duì)照組miRNA-146的含量，所有樣本的檢測(cè)基因表達(dá)量經(jīng)U6 snRNA值調(diào)平，表示為相對(duì)表達(dá)量，采用2^-ΔΔCt法進(jìn)行比較。采用SPSS13.0對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行分析，組間比較采用x2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)表示，符

9、合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（(x)±s）表示，2^-ΔΔCt值資料采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05認(rèn)為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　第二部分
　　所有入選者均在入院后分為病例組及對(duì)照組，編號(hào)后記錄性別、年齡、是否合并高血壓病、冠心病、糖尿病，是否有心血管病家族史及是否吸煙;行雙側(cè)頸動(dòng)脈彩超及經(jīng)胸心臟彩超檢測(cè)雙側(cè)頸動(dòng)脈中膜厚度(LCCA-IMT、RCCA-IMT)、室間隔厚度(IVS)、左心室后壁厚度(LVPW)，按常規(guī)抽取靜脈血檢測(cè)研究對(duì)

10、象的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清肌酐值(CREA)、血清尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血漿總蛋白(TP)、血漿白蛋白(ALB)、空腹血糖(GLU)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血尿酸(URIC)、血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、D-二聚體(D-DI)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比

11、值(INR)等指標(biāo)。采用前文的方法，檢測(cè)研究對(duì)象體內(nèi)的miRNA-146水平。采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行資料分析。計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用Pearson x2檢驗(yàn)或葉氏連續(xù)性修正或Fisher精確檢驗(yàn)表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（(x)±s）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)表示;非參數(shù)檢驗(yàn)采用秩和檢驗(yàn);采用多因素Logistic逐步回歸分析主動(dòng)脈夾層發(fā)生的相關(guān)危險(xiǎn)因素。檢驗(yàn)水平以P＜0.05認(rèn)為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

12、　　結(jié)果:
　　第一部分
　　秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示，病例組2^-ΔΔCt值平均秩和為50.53，對(duì)照組為27.42，使用Mann-Whitney U法算得Z值為-4.459，P值為0.000＜0.05，即病例組miRNA-146的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比有顯著差異，主動(dòng)脈夾層患者的miRNA-146表達(dá)量顯著高于一般非患主動(dòng)脈夾層人群。
　　第二部分
　　將可能與主動(dòng)脈夾層發(fā)生相關(guān)的各獨(dú)立因素（高血壓病、吸煙史、ALB

13、、miRNA-146相對(duì)表達(dá)量2^-ΔΔCt值、D-二聚體）作為自變量納入多因素Logistic回歸分析模型，以是否發(fā)生主動(dòng)脈夾層作為因變量（發(fā)生夾層:Y=1，未發(fā)生夾層:Y=0），結(jié)果顯示，高血壓病是主動(dòng)脈夾層發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而血漿白蛋白水平是主動(dòng)脈夾層發(fā)生的保護(hù)因素。
　　結(jié)論：
　　第一部分
　　通過(guò)RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證，與非主動(dòng)脈夾層人群相比，患有Stanford B型主動(dòng)脈夾層患者靜脈血中miRNA-14