TXNIP參與老年慢性阻塞性肺疾病氧化應(yīng)激的作用及分子機(jī)制研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:明確老年大鼠的年齡點(diǎn);研究TXNIP在老年COPD大鼠模型及老年COPD患者中的表達(dá)變化;探討TXNIP/TRX1的表達(dá)失衡是否參與了老年COPD中氧化和抗氧化的失衡,從而為COPD的防治提供新的理論依據(jù)。
  方法:分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)兩部分。(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1)健康雄性SD大鼠40只,據(jù)月齡分為3月、6月、12月、18月、24月5個(gè)年齡組,每組8只。對(duì)各組大鼠進(jìn)行心臟彩超、腦電圖、肺功能的檢查,觀察各組大鼠心、肝、肺、

2、腎、腦組織形態(tài)學(xué)變化并測(cè)定臟體比,取各組大鼠外周血檢測(cè)生化指標(biāo)包括心功能、肝功能、腎功能、血脂、血糖、血流變、凝血功能。用ELISA檢測(cè)各臟器組織勻漿、外周血及肺泡灌洗液中抗衰老因子 Sirt1的蛋白表達(dá)水平。免疫印跡(western blot)分析各組大鼠肺組織中TXNIP的蛋白表達(dá)變化。明確老年大鼠年齡點(diǎn)。2)健康雄性SD大鼠64只,隨機(jī)將大鼠分為成年組(6月)和老年組,其中各組又分為對(duì)照組、COPD模型組、替米沙坦干預(yù)組、SAHA

3、干預(yù)組,每組各8只,測(cè)定大鼠肺功能并觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變;ELISA檢測(cè)大鼠外周血及肺泡灌洗液中 ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá),免疫組化和Western blot分析大鼠肺組織中 TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。(2)臨床實(shí)驗(yàn):手術(shù)切除肺癌患者肺組織標(biāo)本37例,所有患者術(shù)前均行肺功能檢測(cè),據(jù)年齡分為成年組(<65歲)和老年組(≥65歲),各組又分為對(duì)照組和COPD組。觀察各組患者肺組織病理形態(tài)學(xué)改變,免疫組化和

4、Western blot檢測(cè)各組患者肺組織中TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)。收集60例COPD患者外周靜脈血,分為成年組(<65歲)和老年組(≥65歲),另收集20例正常人的外周靜脈血,分為成年組(<65歲)和老年組(≥65歲)。ELISA檢測(cè)各組患者外周血血清中 ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。將老年COPD組患者按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)2012年版COPD診治指南進(jìn)行嚴(yán)重程度分級(jí),分為輕中度組和重度組,ELISA檢測(cè)各組患者外周血

5、血清中ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。
  結(jié)果:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
 ?。?)各月齡組大鼠在肺組織、腎臟、大腦海馬結(jié)構(gòu)上的形態(tài)學(xué)改變隨著年齡增加有顯著變化,而各月齡組大鼠心臟、肝臟各臟器在形態(tài)學(xué)上組之間無顯著差別。較其他月齡組大鼠相比,24月齡組大鼠在功能學(xué)方面的檢測(cè)包括臟體比、肺功能、心臟彩超、腦電圖各頻段值中的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均下降(P<0.05)。
 ?。?)相比其他月齡組,24月齡組中抗衰老因子Sir

6、t1的表達(dá)在大鼠肺、腦、腎組織勻漿、肺泡灌洗液及外周血血清中表達(dá)減少(P<0.05)。Western bolt結(jié)果顯示24月齡組中TXNIP的蛋白表達(dá)水平較其他月齡組升高(P<0.05);
 ?。?)COPD組大鼠肺功能指標(biāo)(FEV0.3、FEV0.3/FVC%、PEF)較對(duì)照組降低(P<0.05),SAHA干預(yù)組肺功能指標(biāo)較 COPD組降低(P<0.05),替米沙坦組較 COPD組升高(P<0.05),較對(duì)照降低(P<0.05)

7、。老年組與成年組相比,大鼠肺功能指標(biāo)均降低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。COPD模型組大鼠肺部病理學(xué)改變符合COPD的形態(tài)學(xué)特征,替米沙坦組大鼠肺組織病理改變較COPD組明顯改善,而SAHA干預(yù)組大鼠肺組織病理改變較COPD組明顯加重,總而言之,老年組大鼠肺組織病理改變較成年組明顯惡化。
  (4)ROS蛋白表達(dá)水平在COPD組較對(duì)照組顯著增高(P<0.05),在替米沙坦組較COPD組降低(P<0.05),SAHA干預(yù)組較CO

8、PD組增高(P<0.05)。ROS在老年組較成年組增多(P<0.05)。
 ?。?)免疫組化結(jié)果顯示 TXNIP主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞和肺間質(zhì)細(xì)胞,TXNIP在胞漿和胞核均有免疫著色。Western blot結(jié)果顯示COPD組大鼠肺組織中的TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)較對(duì)照組高(P<0.05),替米沙坦干預(yù)組中TXNIP蛋白表達(dá)水平較COPD組減少(P<0.05),TRX1表達(dá)較COPD組增多(P<0.05),SAHA干預(yù)組TXN

9、IP表達(dá)較COPD組增多(P<0.05),TRX1表達(dá)較COPD組減少(P<0.05)。而老年組相比成年組,TXNIP蛋白表達(dá)增多(P<0.05),TRX1表達(dá)減少(P<0.05)。(6)ELISA顯示 COPD組大鼠血及肺泡灌洗液中的TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)較對(duì)照組高(P<0.05),相比 COPD組,替米沙坦干預(yù)組中TXNIP表達(dá)減少(P<0.05),TRX1表達(dá)增多(P<0.05),而SAHA干預(yù)組TXNIP表達(dá)增多(P<0.

10、05),TRX1表達(dá)減少(P<0.05)。而老年組相比成年組,TXNIP蛋白表達(dá)增多(P<0.05),TRX1表達(dá)減少(P<0.05)。
  2.臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  (1)免疫組化結(jié)果顯示人肺組織中 TXNIP主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞和肺間質(zhì)細(xì)胞。TXNIP在胞漿和胞核均有免疫著色。Western blot結(jié)果顯示COPD組人肺組織中TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組高(P<0.05),老年組與成年組比較,老年組中的TX

11、NIP蛋白表達(dá)增多(P<0.05),TRX1表達(dá)減少(P<0.05)。
 ?。?)ELISA結(jié)果顯示人外周血血清中COPD組中的ROS、TXNP、TRX1蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組高(P<0.05),老年組與成年組比較,老年組中的ROS、TXNIP蛋白表達(dá)增多(P<0.05),TRX1表達(dá)減少(P<0.05)。
 ?。?)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示老年COPD重度組外周血血清中ROS、TXNIP蛋白表達(dá)水平較輕中度組增高(P<0.05

12、),而TRX1蛋白表達(dá)較輕中度組減少(P<0.05)。
  (4)直線相關(guān)分析顯示 TXNIP和FEV1(%)、ROS呈正相關(guān)(P<0.05),與TRX1蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.明確24月齡大鼠為老齡大鼠。
  2.TXNIP隨著年齡的增加及病情的加重而升高。在COPD早期階段抗氧化酶 TRX1可能代償性上調(diào)以抵抗氧化應(yīng)激,而隨著年齡的增加及COPD嚴(yán)重程度的加深TRX1逐漸失

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