EBV感染的B-NHL細(xì)胞系IGVH基因分子特征及抗原選擇.pdf

1、B-NHL分類極其復(fù)雜，占淋巴瘤的70～80％，其發(fā)病的分子機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。EBV是一種γ-1型皰疹病毒，與多種腫瘤有關(guān)，如B-NHL中的伯基特淋巴瘤(BL)及DLBCL中的亞型-老年性EBV陽(yáng)性DLBCL都有較高的EBV感染率。EBV的致病機(jī)制極其復(fù)雜，它可能通過自身基因組整合到宿主細(xì)胞基因組中或者表達(dá)其基因產(chǎn)物，直接或間接的引起宿主細(xì)胞的異常[1]。p53基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類多種腫瘤相關(guān)性最高的基因。作為一種腫瘤抑制基因，

2、野生型p53基因常常通過突變或缺失導(dǎo)致P53蛋白功能異常而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。在惡性淋巴瘤中，p53突變的發(fā)生率達(dá)5-25％。在DLBCL患者中，p53突變會(huì)降低患者的完全緩解率，且對(duì)總體生存率有顯著負(fù)效應(yīng)[2，3]。
　　作為成熟B細(xì)胞正常表達(dá)的基因，免疫球蛋白重鏈(IGH)基因包括三個(gè)框架區(qū)(FRs)和三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDRs）。在生發(fā)中心遭遇抗原識(shí)別后，IGH發(fā)生體細(xì)胞超突變(SHM)，即IG基因的V段產(chǎn)生高頻點(diǎn)突變，致使B細(xì)胞產(chǎn)

3、生高親合力的IG分子。這個(gè)過程易受內(nèi)、外因素（如個(gè)體遺傳差異、病毒感染等）干擾而出現(xiàn)差異，構(gòu)成了淋巴瘤發(fā)生的重要高危因素。我們前期研究還發(fā)現(xiàn)不同的淋巴瘤類型患者攜帶的IGVH基因片段有偏向性[4]，且與某些淋巴瘤的預(yù)后相關(guān)[5]。EBV作為淋巴瘤相關(guān)病毒，是否作為一種特定抗原，在淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起作用？其可能的機(jī)制有哪些？
　　我們選取了8株B-NHL細(xì)胞系（分別來(lái)自BL，DLBCL和MCL），分別用PCR、原位雜交和IHC

4、方法檢測(cè)8株細(xì)胞系中LMP1、LMP2、EBER基因和蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)5株細(xì)胞系（Raji、Daudi、Namalwa、OCI-ly10和OCI-ly19）攜帶EBV。基因突變檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)8株B-NHL細(xì)胞p53基因突變主要集中于7號(hào)外顯子，所有突變均為點(diǎn)突變，攜帶EBV的B-NHL細(xì)胞系攜帶3個(gè)p53突變熱點(diǎn)及4個(gè)Loop-L3位點(diǎn)突變，提示預(yù)后不良。同時(shí)，我們用PCR-GeneScan、測(cè)序及突變分析IGVH基因重排、突變、基因片段的

5、使用情況及互補(bǔ)決定區(qū)(CDR3)的分子特征。發(fā)現(xiàn)除Pfeiffer擴(kuò)增陰性外，其余7株均為克隆重排。測(cè)序成功的7株細(xì)胞株中，除Jeko-1未發(fā)生突變外，其余均攜帶突變型IGVH基因，主要是點(diǎn)突變和核苷酸的替換，突變頻率在2.4％至21.2％之間，平均為10.7％;而且EBV陽(yáng)性的2株細(xì)胞(Daudi和OCI-ly19)呈現(xiàn)抗原選擇（R/S＜1.5）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)7株細(xì)胞系偏向性使用VH3(3/7)和VH4(3/7)基因家族，以VH3-21(

6、2/7)和VH4-4(2/7)為主;D片段和J片段則偏向性使用D3和J4片段。偏向使用VH3-21的兩株EBV陽(yáng)性細(xì)胞系（Raji與OCI-ly19）兩者CDR3區(qū)的堿基序列及其編碼的氨基酸一致;另兩株EBV陽(yáng)性細(xì)胞系（Namalwa和OCI-ly10）偏向使用VH4-4，也具有相同的互補(bǔ)決定區(qū)。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)8株B-NHL細(xì)胞系p53基因突變主要集中于7號(hào)外顯子，且EBV陽(yáng)性的B-NHL細(xì)胞系存在3個(gè)p53突變熱點(diǎn)及