培哚普利對心肌肥厚大鼠心肌組織中肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：
　　近年來隨著人們生活節(jié)奏的改變，引起心肌肥厚的病因如高血壓病、2型糖尿病、冠心病、心臟瓣膜病等的發(fā)病率逐年攀升并逐步年輕化，如不加以控制會出現(xiàn)心臟功能進(jìn)行性下降。目前已經(jīng)認(rèn)為心肌肥厚不僅是心力衰竭的前期病變，而且是心腦血管疾病和猝死的獨(dú)立危險因素。
　　心肌肥厚的主要基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)異常表現(xiàn)為：心肌細(xì)胞紊亂處于一種混亂的模式，心肌厚度/血流比例增加導(dǎo)致冠脈微血管功能障礙，重構(gòu)變化。它是由神經(jīng)體液因素介導(dǎo)的，多種內(nèi)源性或

2、外源性活性物質(zhì)共同參與的病理生理反應(yīng)過程。信號分子通過激活絲裂原活化蛋白激酶、Ca2+、蛋白激酶C、磷脂酰肌醇-3激酶、腺苷酸活化蛋白激酶等多種信號途徑，調(diào)控心肌肥厚相關(guān)基因的表達(dá)。p38MAPK是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信號通路中的重要信號分子之一。血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素、轉(zhuǎn)化生長因子β及各種炎癥因子等通過ROS-ASK1-MAPK3/6-p38MAPK及TAK1-

3、MAPK3/6-p38MAPK等通路誘導(dǎo)心肌蛋白合成，使心肌細(xì)胞增大，促進(jìn)心肌肥厚的發(fā)生。肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A（Myocyte enhancer factor2A, MEF2A）作為MEF2轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，主要介導(dǎo)信號傳導(dǎo)和肌肉組織中結(jié)構(gòu)蛋白的形成，并且是p38MAPK信號通路下游的效應(yīng)感受器。P38MAPK通過磷酸化MEF2A的轉(zhuǎn)錄活化區(qū)域，啟動MEF2A二聚體與心肌細(xì)胞表達(dá)蛋白的DNA序列結(jié)合，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大。
　　腎素-

4、血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，是促使心肌肥厚發(fā)生和發(fā)展的主要神經(jīng)體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)，又稱為 RAAS系統(tǒng)。在這個系統(tǒng)中血管緊張素Ⅱ是主要成分，與血管緊張素受體結(jié)合后產(chǎn)生一系列生物學(xué)效應(yīng)。RAAS系統(tǒng)失衡時會引起血壓升高、電解質(zhì)紊亂、心肌重構(gòu)、心肌缺血等病理改變。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI)類藥物能阻止血管緊張素Ⅰ向血管緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)化，減少血管緊張素Ⅱ的生成，阻止心

5、肌重構(gòu)的進(jìn)展。
　　目的：
　　本實(shí)驗通過對大鼠皮下注射異丙腎上腺素制作心肌肥厚模型，觀察MEF2A在大鼠心肌肥厚組織中的活性變化，探討心肌肥厚信號傳導(dǎo)通路中MEF2A的作用，及應(yīng)用ACEI類藥物培哚普利干預(yù)后對MEF2A表達(dá)及心肌肥厚發(fā)生的影響。
　　方法：
　　應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表將30只健康雄性的Wistar大鼠分為對照組、模型組及藥物干預(yù)組，每組各10只。模型組和藥物干預(yù)組大鼠按照3mg/(kg·d）的劑量皮下

6、注射異丙腎上腺素（isoproterenol，ISO），對照組大鼠依上述劑量皮下注射蒸餾水。同時，將培哚普利按照1mg/(kg·d)的劑量溶于2 ml蒸餾水中對藥物干預(yù)組大鼠進(jìn)行灌胃處理，而對照組和模型組大鼠按上述劑量給予生理鹽水灌胃，連續(xù)10 d。10天后稱取3組大鼠的體重，解剖大鼠，稱重心臟質(zhì)量及左心室質(zhì)量，計算心臟肥厚指數(shù)。對3組大鼠左心室心肌組織進(jìn)行HE染色后觀察心肌形態(tài)，應(yīng)用免疫組化方法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-RCR)分別

7、檢測心肌細(xì)胞中MEF2A蛋白表達(dá)和MEF2A的mRNA含量。
　　結(jié)果：
　　1、心臟質(zhì)量指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)
　?、偃馁|(zhì)量指數(shù)（ HW/BW）：對照組、藥物干預(yù)組及模型組分別為1.90±0.13mg/g、2.69±0.32mg/g、3.78±0.22mg/g，組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義，模型組>藥物干預(yù)組>對照組（P<0.05）。②左心室質(zhì)量指數(shù)（LVW/BW）：對照組、藥物干預(yù)組及模型組分別為1.44±0.10mg/

8、g、1.93±0.17mg/g、2.47±0.09mg/g，組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義模型組>藥物干預(yù)組>對照組（P<0.05）。
　　2、HE染色
　　對照組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)規(guī)整，排列整齊；模型組大鼠心肌纖維排列紊亂、斷裂，心肌細(xì)胞核大深染，細(xì)胞間質(zhì)明顯的纖維結(jié)締組織增生，伴有大量炎癥細(xì)胞侵潤；藥物干預(yù)組介于兩者之間。
　　3、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）
　　RT-PCR檢測3組大鼠心肌肥厚組織中MEF2A

9、mRNA含量模型組、藥物干預(yù)組、對照組分別為0.65±0.04、0.31±0.03、0.19±0.02，組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異，模型組>藥物干預(yù)組>對照組(P<0.05)。
　　4、免疫組化方法
　　MEF2A在心肌細(xì)胞中免疫組化染色后呈棕色顆粒，正常心肌細(xì)胞胞漿中可見少量棕色顆粒；模型組胞漿內(nèi)可見大量棕色顆粒；干預(yù)組大鼠心肌細(xì)胞胞漿中的棕色顆粒介于對照組和模型組之間。組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異。3組大鼠心肌組織中MEF2A陽性區(qū)