C-EBPα參與調(diào)節(jié)Per2基因?qū)Π籽562細(xì)胞的表型影響及其機(jī)制研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文CEBPα參與調(diào)節(jié)Per2基因?qū)Π籽562細(xì)胞的表型影響及其機(jī)制研究姓名：孫成銘申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：馮文莉20090501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文瘤生長的影響，為深入闡明Per2在CML發(fā)病機(jī)制和治療作用提供新的思路。方法：1外源性C／EBPot對(duì)K562細(xì)胞表型影響及其下游相關(guān)基因的變化(1)將C／EBPot表達(dá)質(zhì)粒pEGFP—C／EBPot及空載對(duì)照質(zhì)粒pEGFP分別經(jīng)陽

2、離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞，用G418篩選出C／EBPa穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。瑞氏姬姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面分化抗原CDllb和細(xì)胞周期及凋亡，電鏡觀察細(xì)胞凋亡，RTPCR及Westernblot方法檢測下游Per2、CyclinB1和Cmyc基因的表達(dá)。(2)設(shè)計(jì)針對(duì)Per2基因的特異性及非特異性siRNA序列，構(gòu)建siRNAPer2質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入K562／C／EBPot穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，收集帶紅色熒光標(biāo)記的siRN

3、APer2K562／C／EBPot細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。檢測Per2干擾前后的基因表達(dá)水平變化。2Per2基因?qū)562細(xì)胞增殖及凋亡的影響及其抗白血病機(jī)制將Per2表達(dá)質(zhì)粒pcDNA31一Per2及空載對(duì)照質(zhì)粒pcDNA31分別經(jīng)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞，用G418篩選出Per2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。瑞氏姬姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)，臺(tái)盼藍(lán)拒染法和MTT法檢測K562細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和凋亡，電鏡觀察細(xì)胞凋亡，RTPCR及West