hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)在腎癌中的研究.pdf

1、背景：人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)是端粒酶活化過程中的限速酶，而端粒酶的活性與大多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)，這其中也包括腎癌。相關(guān)文獻(xiàn)證明在多種惡性腫瘤中hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化與端粒酶的表達(dá)有密切關(guān)系。腎癌的發(fā)生也與hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化有關(guān)。腎癌是成人中常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。早期局限于腎包膜的腎癌手術(shù)治療預(yù)后較好，但腎癌缺

2、乏明確的腫瘤特異性標(biāo)志物來(lái)早期診斷，因此研究新型無(wú)創(chuàng)性診斷方法從而及早進(jìn)行診療具有較高的臨床意義。許多腫瘤相關(guān)基因在腎癌患者組織細(xì)胞以及尿沉渣中的甲基化已被證實(shí)有意義，這對(duì)于腎癌的診斷與發(fā)生機(jī)制有重要意義。
　　目的：研究腎癌組織和尿沉渣中hTERT啟動(dòng)子區(qū)甲基化位點(diǎn)，尋找對(duì)于腎癌診斷有意義的高甲基化位點(diǎn)，并探究檢測(cè)腎癌患者尿沉渣中hTERT啟動(dòng)子區(qū)甲基化對(duì)于腎癌診斷的可行性。
　　方法：查找文獻(xiàn)尋找腫瘤相關(guān)hTERT啟動(dòng)子

3、區(qū)高甲基化可疑位點(diǎn)，已知文獻(xiàn)甲基化引物兩組（M-250、U-250及M-600、U-600）以及應(yīng)用甲基化引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)甲基化引物1組(M-300、U-300)。收集76位腎癌患者（腎癌組）手術(shù)前晨尿標(biāo)本及其中28例腎癌腫瘤組織、28例腎癌癌旁正常組織，38例非腎癌患者（對(duì)照組）術(shù)前晨尿標(biāo)本。應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR，MSP)檢測(cè)尿沉渣中hTERT基因甲基化狀態(tài)，分析證明對(duì)于腎癌診斷有意

4、義的hTERT啟動(dòng)子區(qū)高甲基化位點(diǎn)及其甲基化結(jié)果與臨床指標(biāo)相關(guān)性;應(yīng)用焦磷酸測(cè)序法檢測(cè)腎癌組織與腎癌癌旁正常組織中hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，尋找有意義的甲基化位點(diǎn)。
　　結(jié)果：⑴hTERT啟動(dòng)子區(qū)引物M-250、U-250及M-600、U-600在腎癌組與對(duì)照組尿沉渣中甲基化率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。引物M-300、U-300在腎癌組與對(duì)照組的尿沉渣中甲基化率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑵通過腎癌組尿沉渣的甲基化狀態(tài)與臨床資料分析，得出性別、年

5、齡、腫瘤TNM分期以及腫瘤的大小與hTERT基因甲基化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即上述各因素與hTERT基因高甲基化無(wú)關(guān)。⑶焦磷酸測(cè)序定量的證明腎癌組織中hTERT甲基化率高于癌旁正常組織，甲基化特異性PCR定性的證明腎癌組尿沉渣中hTERT高甲基化率高于對(duì)照組尿沉渣，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：②明確了hTERT啟動(dòng)子區(qū)高甲基化在腎癌患者的術(shù)前尿沉渣及腎癌組織中存在，其甲基化狀態(tài)與年齡、性別、腫瘤TNM分期以及腫瘤的大小無(wú)關(guān)；②證明尿沉渣