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文檔簡介
1、目的:探討FetuinA、MGP通過抑制NF-KB通路對(duì)磷酸鈣晶體誘導(dǎo)HK-2表達(dá)及釋放MCP-1、 TGF-β的調(diào)控作用。
方法:1、采用100ug/mlCaP刺激HK-2，于刺激后1、3、6、24、48、72h提取各組細(xì)胞總RNA, RT-PCR分別檢測細(xì)胞于(1、3、6h)NF-KB mRNA及MCP-1mRNA、(24、48、72h)TGF-βmRNA表達(dá)水平。2、分別采用100ug/mlCaP+50mmol/L PD
2、TC、100ug/mlCaP+100mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+200mmol/L PDTC刺激HK-2,于(6、72h)提取細(xì)胞總RNA,RT-PCR分別檢測細(xì)胞于6h MCP-1mRNA及72hTGF-βmRNA表達(dá)水平。3.分別采用100ug/mlCaP+1000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2500ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+5000ng/mlFetuinA、100u
3、g/mlCaP+2000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+4000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+6000ng/mlMGP刺激HK-2，于刺激后3h提取各組細(xì)胞總RNA, RT-PCR分別檢測細(xì)胞于3h NF-KB mRNA表達(dá)水平。4、采用100ug/ml CaP刺激HK-2，于刺激后1、3、6、24、48、72h收集細(xì)胞培養(yǎng)液;分別采用100ug/ml CaP+50mmol/L PDTC、100ug/ml CaP+
4、100mmol/L PDTC、100ug/ml CaP+200mmol/L PDTC刺激HK-2，于刺激后6、72h收集細(xì)胞培養(yǎng)液， ELISA法檢測MCP-1、 TGF-β含量。
結(jié)果:1、100ug/ml CaP HK-2組，NF-KBmRNA、MCP-1mRNA、TGF-β mRNA表達(dá)均高于正常對(duì)照HK-2，其中NF-KBmRNA表達(dá)于3h達(dá)高峰，MCP-1mRNA表達(dá)于6h達(dá)高峰，TGF-βmRNA表達(dá)于72h達(dá)高峰
5、，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2、100ug/mlCaP+50mmol/LPDTC、100ug/mlCaP+100mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+200mmol/L PDTC組HK-2 MCP-1mRNA、TGF-β mRNA表達(dá)均低于100ug/mlCaP組，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3、100ug/mlCaP+1000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2500
6、ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+5000ng/mlFetuinA、100ug/mlCaP+2000ng/mlMGP、100ug/ml CaP+4000ng/mlMGP、100ug/mlCaP+6000ng/mlMGP組HK-2NF-KB mRNA表達(dá)均低于100ug/mlCaP組，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4、100ug/ml CaP HK-2組細(xì)胞培養(yǎng)液上清MCP-1、TGF-β含量均高于正常對(duì)
7、照HK-2，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。100ug/ml CaP+50mmol/L PDTC、100ug/mlCaP+100mmol/LPDTC、100ug/ml CaP+200mmol/L PDTC組細(xì)胞培養(yǎng)液上清MCP-1、TGF-β含量均低于100ug/ml CaP組，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
結(jié)論:1.磷酸鈣作用于腎小管上皮細(xì)胞誘導(dǎo)其釋放MCP-1、TGF-β炎癥介質(zhì)，兩者可
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