巨噬細胞對腎小管上皮細胞-磷酸鈣晶體體系中Fetuin A表達的調(diào)控作用.pdf

1、目的:探討巨噬細胞對腎小管上皮細胞(HK-2)-磷酸鈣晶體體系中胎球蛋白A表達的調(diào)控作用及體系中胎球蛋白A-高遷移率族蛋白B1(HMGB1)間的關(guān)系。
　　方法:實驗分為兩部分，第一部分，細胞分為A、B、C、三組，A組:單獨培養(yǎng)腎小管上皮細胞;B組:腎小管上皮細胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml);C組:腎小管上皮細胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml)+巨噬細胞;C組利用Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)建立巨噬細胞-磷酸鈣晶體-腎小管上皮

2、細胞體外共培養(yǎng)體系。各組分別于6h、9h、12h后，在相差顯微鏡下對各組腎小管上皮細胞的形態(tài)變化進行觀察;隨后收集腎小管上皮細胞，將所收集的腎小管上皮細胞用于提取總RNA，分別檢測各組細胞中的胎球蛋白A的表達水平;將各組細胞培養(yǎng)液離心后收集上清，檢測各組細胞培養(yǎng)液上清液中的MCP-1水平。第二部分實驗中，細胞分為D、E、F、三組，D組:單獨培養(yǎng)腎小管上皮細胞(HK-2);E組:腎小管上皮細胞+磷酸鈣晶體(HK-2+CaP);F組:腎小管

3、上皮細胞+磷酸鈣晶體(100ug/ml)+HMGB1（HK-2+CaP+HMGB1），F(xiàn)組中，將不同濃度的HMGB1（0ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml）對腎小管上皮細胞進行干預刺激，24h后通過RT-PCR技術(shù)檢測腎小管上皮細胞中胎球蛋白A的表達水平。
　　結(jié)果:各組中，經(jīng)過磷酸鈣刺激后的腎小管上皮細胞較正常對照組的腎小管上皮細胞在形態(tài)學上未見明顯差別。胎球蛋白A在A、B、C三組中的表達水平差

4、異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中B、C組中腎小管上皮細胞的胎球蛋白A表達量較A組中的低，C組的表達量較B組低;另外，腎小管上皮細胞-磷酸鈣晶體-巨噬細胞組中的MCP-1濃度明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。HMGB1刺激腎小管上皮細胞后，細胞中的胎球蛋白A表達上調(diào)，且隨著所添加的HMGB1濃度的增加而呈現(xiàn)出增高的趨勢，加入1000ng/ml及2000ng/ml組的胎球蛋白A表達量明顯高于對照組及500ng/ml組，

5、差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，2000ng/ml組的表達量明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.在共培養(yǎng)體系所模擬的體內(nèi)腎小管腔內(nèi)環(huán)境中，磷酸鈣晶體與腎小管上皮細胞的相互作用能夠誘使腎小管上皮細胞出現(xiàn)炎癥反應并釋放炎癥因子，使細胞內(nèi)的Fetuin-A表達下調(diào)，這可能與其中的炎癥因子的調(diào)控相關(guān);2.在共培養(yǎng)體系所模擬的體內(nèi)腎小管腔內(nèi)環(huán)境中，巨噬細胞對腎小管上皮細胞-磷酸鈣晶體體系中的細胞炎癥因子有顯著