季也蒙畢赤酵母GZ1菌株嗜殺因子的初步研究.pdf

1、嗜殺酵母可以產(chǎn)生一類具有抗微生物活性的外毒素，通常把這種外毒素稱為嗜殺因子(Killer toxin)，它們通常是一些蛋白質(zhì)或者糖蛋白。嗜殺酵母分泌的外毒素可以抑制或殺死一些敏感菌株，并且對自身分泌的嗜殺因子具有免疫性。研究發(fā)現(xiàn)從海洋中分離的海洋嗜殺酵母季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)GZ1菌株對引起梭子蟹“乳化病”的病原酵母WCY具有抑制作用。
　　 本實驗研究了GZ1菌株的嗜殺因子在不同NaCl濃

2、度(0％，3％，6％，8％)、溫度(15，20，25，30℃)、pH(3.0，4.0，4.5，5.0，6.0)值條件下的抑菌效果。該嗜殺因子的最佳作用條件是NaCl濃度0％、pH為4.0，培養(yǎng)溫度為15℃。研究了鹽度、溫度和pH值對海洋嗜殺酵母GZ1菌株發(fā)酵產(chǎn)嗜殺因子的影響，結(jié)果表明該菌株在溫度為20℃，培養(yǎng)基中NaCl含量為0％，pH為4.0時產(chǎn)生嗜殺因子的能力最強。
　　 確定了不同培養(yǎng)條件對該菌株產(chǎn)生的β-1，3-葡聚糖酶

3、活性的影響，分別測定了不同培養(yǎng)時間(1d，2d，3d，4d，5d，6d)、不同反應(yīng)溫度(10，20，30，40，50，60℃)不同培養(yǎng)溫度(15，20，25，30，35℃)、不同pH(4.0，4.5，5.0，6.0，7.0)、搖瓶裝液量250ml三角瓶中裝液量分別為(20，30，40，50，60ml)、不同接種量(1，2，3，4，5，6％)對發(fā)酵條件的影響以及最佳碳源(葡萄糖，蔗糖，麥芽糖，甘油，乳糖，玉米粉，麥麩糊精，可溶性淀粉)和最

4、佳氮源(硫酸銨，硝酸銨，氯化銨，磷酸氫二銨，尿素，牛肉膏，蛋白胨)的確定。實驗結(jié)果表明最佳培養(yǎng)時間為3d、最佳反應(yīng)溫度是40℃、最佳培養(yǎng)溫度為20℃、最適pH為4.0時酶活最大、250ml三角瓶中的最佳裝液量為30ml、最佳接種量為3％時酶活最大、最佳碳源為葡萄糖、最佳氮源為蛋白胨。
　　 本實驗通過紫外線-硫酸二乙酯復(fù)合誘變篩選出一株抑菌能力較強并且遺傳性狀穩(wěn)定的的菌株，抑菌能力提高了22.7％、經(jīng)過復(fù)篩后該誘變菌株的β-1，

5、3-葡聚糖酶酶活提高了17.8％。
　　 進一步測定了通過紫外線-硫酸二乙酯復(fù)合誘變篩選出的抑菌能力較強并且遺傳性狀穩(wěn)定的菌株在發(fā)酵罐中的最佳發(fā)酵條件，研究了轉(zhuǎn)速(100，150，200，250rpm)、溫度(15，20，25，30，35℃)、不同起始pH(3.0，4.0，5.0，6.0，7.0)值對發(fā)酵條件的影響。實驗結(jié)果表明在發(fā)酵罐中的最佳發(fā)酵條件為轉(zhuǎn)速200rpm、發(fā)酵溫度為20℃、起始pH值為4.0時的β-1，3-葡聚糖