葫蘆素E對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑作用.pdf

1、目的：
　　肺癌是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤之一，是世界上癌癥相關(guān)死亡的首要原因。臨床上將肺癌分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌兩種類(lèi)型，其中非小細(xì)胞肺癌是其最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，約占肺癌的85％。肺癌的治療方法主要包括手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療、放射治療。然而，大多數(shù)常用的化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞缺乏特異性，而且化療的臨床療效受到化療藥物副作用、毒性和抗藥性的限制，導(dǎo)致肺癌患者總的生存率仍然沒(méi)有明顯的改善，平均5年生存率仍然較低。因此，尋找安全、高效、無(wú)耐藥

2、的新型抗腫瘤藥物成為目前肺癌研究的熱點(diǎn)。
　　葫蘆素類(lèi)化合物(cucurbitacins)是從葫蘆科等植物中分離得到的一類(lèi)四環(huán)三萜類(lèi)化合物，具有廣泛的藥理活性?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)40多種，有葫蘆素A、B、C等。該化合物除有保肝、抗化學(xué)致癌、提高機(jī)體免疫力、抗炎等多種生物活性外，還具有抗腫瘤活性。目前研究證實(shí)，多種葫蘆素提取物，葫蘆素B、E、I和Q等能顯著降低惡性腫瘤細(xì)胞中STAT3的活性，抑制其磷酸化，在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)，對(duì)異種移植瘤

3、的種植生長(zhǎng)亦起到顯著的抑制作用。葫蘆素類(lèi)化合物除作用于STAT3信號(hào)通路外，還可以通過(guò)抑制有絲分裂蛋白活化激酶(MAPK)通路進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在腫瘤細(xì)胞增殖及腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。葫蘆素E(cucurbitacin E，CuE)是從葫蘆科植物中提取的四環(huán)三萜類(lèi)化合物，已被證實(shí)具有廣泛的生物學(xué)活性，包括抗腫瘤、抗化學(xué)致癌和抗感染等多種藥理作用。研究表明葫蘆素E可抑制包括膀胱癌、肝癌、胰腺癌、白血病、乳腺癌、前列腺癌等在內(nèi)

4、的多種腫瘤細(xì)胞的增殖，通過(guò)抑制JAK/STAT3信號(hào)通路，降低STAT3活性，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡是其主要作用機(jī)制。然而，CuE在非小細(xì)胞肺癌中的抗腫瘤作用及機(jī)制研究很少有報(bào)道。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，研究葫蘆素E對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用，并探討其作用的相關(guān)機(jī)制，為葫蘆素E應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌的治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用MTT法檢測(cè)不同濃度CuE（0、1、10、100以及

5、1000nM）處理A549細(xì)胞24、48和72小時(shí)后的細(xì)胞增殖情況。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度CuE(0、100、200以及400 nM)處理A549細(xì)胞24小時(shí)后的細(xì)胞凋亡的變化。用Westernblot法檢測(cè)被處理細(xì)胞中相關(guān)信號(hào)通路p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Fas蛋白水平的表達(dá)變化。
　　每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，采用EXCEL數(shù)據(jù)庫(kù)錄用數(shù)據(jù)，各組數(shù)據(jù)均使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件

6、包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，根據(jù)數(shù)據(jù)的正態(tài)性，選擇單因素方差分析(ANOVA)、SNK法、LSD等進(jìn)行多重比較。當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、CuE可顯著抑制A549細(xì)胞的增殖（P＜0.05），呈時(shí)間和濃度依賴性。
　　2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示隨著不同濃度的CuE(100、200、400 nM)處理濃度的逐漸升高，A549細(xì)胞凋亡率由(4.63±0.70％)分別提

7、高到(6.80±0.10％)、(20.53±0.49％)、(24.57±0.55％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。
　　3、Western blot結(jié)果顯示，CuE處理A549細(xì)胞，可降低p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表達(dá)水平，增強(qiáng)Fas蛋白表達(dá)水平，且上述作用隨CuE濃度升高而增強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　1、葫蘆素E可顯著抑制A549細(xì)胞的增殖。
　　2、