生長抑素受體介導(dǎo)的靶向治療對非小細(xì)胞肺癌耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：檢測人非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)組織SSTR2和SSTR5的表達(dá)，并分析其與患者病理分期、預(yù)后的關(guān)系；合成奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物，檢測人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株生長抑素受體(Somatostatin Receptors，SSTRs)的表達(dá)，并驗(yàn)證不同結(jié)構(gòu)的奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物是否對其具有靶向治療作用；采用不用方式誘導(dǎo)建立非小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株，并檢測奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物對其耐藥的逆轉(zhuǎn)作用；探

2、討奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物逆轉(zhuǎn)耐藥的可能機(jī)制。研究奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物在體外及體內(nèi)作用于NSCLC后對其多藥耐藥相關(guān)基因表達(dá)的影響，探討其是否能延緩或降低腫瘤耐藥的產(chǎn)生。
　　 方法：免疫組化檢測人非小細(xì)胞肺癌組織SSTR2和SSTR5的表達(dá)；采用RT-PCR從mRNA水平檢測人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和H157 SSTRs的表達(dá)；采用MTT和流式細(xì)胞術(shù)檢測奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物對兩細(xì)胞株的毒性和凋亡的影響；同時(shí)采用MTT檢測偶聯(lián)物能否逆

3、轉(zhuǎn)不用方式誘導(dǎo)建立的耐藥細(xì)胞株對紫杉醇的耐藥作用；流式細(xì)胞術(shù)分析耐藥細(xì)胞株的周期分布，實(shí)時(shí)定量PCR檢測其SSTRs和多藥耐藥相關(guān)基因的表達(dá)，探討偶聯(lián)物逆轉(zhuǎn)耐藥的可能機(jī)制；實(shí)時(shí)定量PCR檢測紫杉醇及其偶聯(lián)物在體外及體內(nèi)作用于A549細(xì)胞后其多藥耐藥相關(guān)基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：SSTR2和SSTR5在NSCLC組織的表達(dá)率分別為62.7％和61.0％，在癌旁組織的表達(dá)率分別為為13.33％(2/15)和20.00％(3/15)N

4、SSTR2、SSTR5蛋白表達(dá)與NSCLC的TNM分期有密切關(guān)系(P＜0.05)，其表達(dá)增高提示預(yù)后較好，生存期長；但與患者的年齡、性別、吸煙與否、病理類型、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯關(guān)系(P＞0.05)。
　　 A549細(xì)胞檢測到SSTRl～SSTR5 mRNA的表達(dá)，而H157細(xì)胞除有SSTRl和SSTR4 mRNA的表達(dá)外，其他受體均未檢測到mRNA的表達(dá)。對于SSTR2和SSTR5陽性的A549細(xì)胞，奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物

5、能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的活性，并具有濃度和時(shí)間依賴性，同時(shí)能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其作用與紫杉醇類似；而對于SSTR2和SSTR5陰性的H157細(xì)胞，偶聯(lián)物較紫杉醇表現(xiàn)出更低的細(xì)胞毒性和誘導(dǎo)凋亡能力。
　　 成功建立了A549-P、A549-PS和A549-S三種非小細(xì)胞肺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞系，其耐藥指數(shù)分別為6.48、77.84和9.98，并伴有細(xì)胞形態(tài)、塵長增殖和細(xì)胞周期的改變；A549-S的MDR-1、MRP-1、BCRP均有不同程度的

6、升高；A549-PS的MDR-1和A549/P的MRP-1也升高，而其他耐藥基因則下調(diào)。奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物能顯著抑制耐藥細(xì)胞株的活性，其作用強(qiáng)于紫杉醇。
　　 紫杉醇在體外及體內(nèi)作用于A549細(xì)胞后，MDR-1、MRP-1的表達(dá)均增高。而PTX-0CT作用后，其MDR-1、MRP-1的表達(dá)明顯低于PTX組。2PTX-OCT在體外作用后，MDR-1、MRP-1的表達(dá)低于PTX組，但高于PTX-OCT處理組；而在體內(nèi)，2PTX-OC

7、T處理組MDR-1、MRP-1的表達(dá)與PTX-OCT組類似。BCRP的相對表達(dá)改變不明顯。
　　 結(jié)論：NSCLC組織具有較高的SSTR2、SSTR5表達(dá)率，而癌旁正常組織表達(dá)較低；并且其表達(dá)提示NSCLC預(yù)后好，生存期長；且與癌惡變程度相關(guān)，有可能作為判斷NSCLC預(yù)后的指標(biāo)。奧曲肽紫杉醇偶聯(lián)物對SSTR2和SSTR5陽性的腫瘤細(xì)胞具有與紫杉醇相似的抗腫瘤活性；而對SSTR2和SSTR5陰性的腫瘤細(xì)胞則具有更弱的毒性:表現(xiàn)出一