環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A對(duì)大鼠海馬LTP的影響.pdf

1、雙酚A(biphenol A，BPA)，是一種具有雙重作用的激素類(lèi)物質(zhì)，它的雙重作用是指能夠產(chǎn)生擬雌激素和抗雌激素的效應(yīng)。BPA作為一種非常典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，能夠在記憶形成過(guò)程中對(duì)突觸的可塑性和信息的儲(chǔ)存起到至關(guān)重要的作用。雌激素能夠參與大腦內(nèi)部突觸可塑性的維護(hù)并且可以直接的促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞突觸的形成以及軸突和樹(shù)突的產(chǎn)生、生長(zhǎng)。因?yàn)榇萍に乜膳c膜上的受體作用后通過(guò)誘導(dǎo)的各種信號(hào)分子的快速激活并產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用。雌二醇可以

2、影響細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)途徑的轉(zhuǎn)導(dǎo)，并以此基礎(chǔ)上來(lái)調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)記憶的相關(guān)功能。BPA能夠影響突觸的結(jié)構(gòu)，也可以影響突觸功能的可塑性，但具體的作用機(jī)制并不清楚。本實(shí)驗(yàn)首先研究了不同濃度的BPA對(duì)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(Long-term potentiation，LTP)的影響，接下來(lái)應(yīng)用雌激素受體阻斷劑(ICI182，780)或MEK1/2阻斷劑(U0126)預(yù)處理，用以探究雌激素受體和ERK(Extracellularsignal-regulated ki

3、nases)信號(hào)通路是否參與了BPA對(duì)LTP作用的這一過(guò)程，并進(jìn)行深入的分析BPA作用于LTP的分子機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)利用電生理技術(shù)來(lái)記錄離體橫切大鼠腦片的海馬齒狀回區(qū)域的場(chǎng)興奮性突觸后電位（field Excitatory Postsnaptic potential，fEPSP）和LTP。選取清潔級(jí)的5～6周齡的雄性Wistar大鼠，將其快速斷頭，利用切片機(jī)制備成厚度為350μm的腦片，放置于持續(xù)通入95％氧氣和5％二氧化

4、碳混合氣的人工腦脊液(Artificial Cerebrospinal fluid，ACSF)的孵育室中，室溫下提前孵育1小時(shí)后待使用時(shí)再進(jìn)行轉(zhuǎn)移。記錄時(shí)將腦片轉(zhuǎn)移到記錄槽中，利用微操縱儀將同心圓電極和玻璃記錄電極放置在海馬齒狀回區(qū)域，分別將腦片急性暴露于1、10、100、1000 nM BPA并持續(xù)以ACSF灌流，在藥物孵育30 min后在基礎(chǔ)刺激為0.033 Hz的條件下開(kāi)始記錄腦片fEPSP，30 min后給予腦片參數(shù)為2串100

5、 Hz的高頻刺激，繼續(xù)給予與高頻前相同條件的基礎(chǔ)刺激并利用pClamp10.3軟件測(cè)量fEPSP的峰值，并計(jì)算在HFS后0～60 min中的EPSP的幅值與在基礎(chǔ)刺激下30 min的EPSP幅度平均值比值，作為L(zhǎng)TP的幅值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(means±S.E.M.)來(lái)表示，并進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)和雙尾t檢驗(yàn)(two-tailed t test)。
　　結(jié)果:1.不同濃度的BPA急性處理

6、海馬腦片（預(yù)孵育30 min后開(kāi)始記錄并持續(xù)給藥），發(fā)現(xiàn)BPA(1～1000 nM)對(duì)高頻刺激后的峰值均有抑制作用;但100 nMBPA顯著增強(qiáng)LTP的維持(191.30±10.46％，比對(duì)照組升高34.80％，p＜0.01)，而1000 nM BPA對(duì)LTP維持表現(xiàn)出抑制效應(yīng)(121.45±4.01％，比對(duì)照組降低15.50％，p＜0.05)。
　　2.100 nM BPA對(duì)LTP的增強(qiáng)作用可以被雌激素受體阻斷劑ICI182，7

7、80抑制(126.75±7.12％，比BPA組降低33.89％，p＜0.001);MEK1/2阻斷劑U0126預(yù)處理不能誘導(dǎo)LTP，但先用BPA預(yù)孵育30 min再加入U(xiǎn)0126共同作用，BPA誘導(dǎo)的LTP增強(qiáng)作用被部分抑制(152.19±3.8％，比BPA組降低20.62％，p＜0.01)。
　　3.當(dāng)100 nM BPA與10 nM17β-E2共同處理時(shí)，BPA可以完全抑制E2對(duì)基礎(chǔ)EPSP的增強(qiáng)作用(122.25±4.59％