環(huán)境內(nèi)分泌干擾物壬基酚快速生物檢測技術(shù)研究.pdf

1、壬基酚是已經(jīng)確認的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物之一，且在環(huán)境中的污染狀況不容樂觀，對其進行監(jiān)測和評估是環(huán)境監(jiān)測和治理的一項重要內(nèi)容。使用儀器進行檢測雖然準確，但費時、操作復雜、成本高。本實驗的主要目的是研究壬基酚的快速、簡便、低成本的生物檢測技術(shù)。 利用有機化學方法通過曼尼赫反應使壬基酚酚羥基臨位上的活潑氫被羰基取代，再與載體蛋白的氨基進行結(jié)合，制備出壬基酚.蛋白結(jié)合物。通過測定吸光度值變化并計算結(jié)合比，結(jié)果顯示壬基酚與牛血清白蛋白和卵清白

2、蛋白的結(jié)合比分別為18:1和12:1。利用得到的壬基酚-蛋白結(jié)合物制備出壬基酚多克隆抗體，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實驗測定其效價為1:78125。采用棋盤滴定實驗確定ELISA測定樣品最適條件，對標準系列進行測定并繪制標準曲線，經(jīng)計算檢出限(IC90)約為8ng/ml，具有較好的特異性。 通過加熱攪拌用檸檬酸鈉還原氯金酸法制備納米膠體金，經(jīng)紫外可見分光光度計掃描推斷其粒徑大小及均一度，經(jīng)場發(fā)射透射電鏡觀察，結(jié)果顯示膠體金粒徑約為19nm，

3、且分布比較均勻。通過最適條件的摸索，確定壬基酚多克隆抗體與膠體金進行有效結(jié)合的最適pH為7.6，最適蛋白加入量為每毫升膠體金加入24μg抗體。根據(jù)上述條件制備免疫膠體金并對制備過程進行監(jiān)測，經(jīng)滲濾實驗證明結(jié)合物具有免疫活性，確認結(jié)合成功。 經(jīng)比較實驗，確定膠體金結(jié)合釋放墊為上海金標生物科技有限公司型號為SBO6的玻璃膜，該膜上噴涂的免疫膠體金中壬基酚抗體濃度約為48μg/ml，層析材料為密理博(Millipore)公司型號為HF

4、Bl350220的硝酸纖維素膜，檢測線(NP-OVA)劃線濃度為0.52mg/ml，質(zhì)控線劃線濃度為羊抗兔IgG稀釋10倍。用制得的免疫層析試紙條檢測已知含有壬基酚的樣品10個，靈敏度為(4.4±2.5)μg/ml，在4℃并加入干燥劑密封的情況下儲存6個月能保持原有的檢測靈敏度不變。試紙條在10min左右出現(xiàn)清晰的條帶，檢測時間短，穩(wěn)定性良好，符合快速檢測要求，能夠?qū)崿F(xiàn)壬基酚污染事故的快速定性檢測。 本實驗探索的ELISA法和試