NKp30+ NK細(xì)胞參與Peg-IFn-α-2b治療慢性乙型肝炎中HBV病毒的清除.pdf

1、目前治療慢性乙型肝炎的藥物主要有三大類:短效的α-干擾素，長(zhǎng)效聚乙二醇化的α-干擾素以及核苷或核苷酸類似物。但是幾種藥物治療后HBV e抗原的轉(zhuǎn)陰率不高，長(zhǎng)效干擾素只有30％,而核苷類似物更低僅有20％。因此如何提高干擾素治療的有效率就顯得尤為重要。找到干擾素應(yīng)答和不應(yīng)答病人之間的差異的免疫學(xué)機(jī)制是解決這一問(wèn)題的關(guān)鍵。
　　自然殺傷細(xì)胞在肝臟中占總淋巴細(xì)胞的30-50％長(zhǎng)效干擾素可以通過(guò)直接或者間接的方式活化NK細(xì)胞，同時(shí)多個(gè)調(diào)控

2、NK細(xì)胞活化的受體對(duì)于活化NK細(xì)胞清除乙肝病毒有促進(jìn)作用。
　　本課題的目的旨在探討NK細(xì)胞和長(zhǎng)效干擾素應(yīng)答之間的關(guān)系。我們選取了102例HBeAg陽(yáng)性的慢性乙型肝炎患者。接受為期一年的長(zhǎng)效干擾素治療，并且進(jìn)行半年的隨訪。對(duì)干擾素治療前后病人外周血NK細(xì)胞進(jìn)行表型和功能的鑒定，同時(shí)進(jìn)行病毒學(xué)臨床指標(biāo)的監(jiān)測(cè)，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析和比較，我們得到以下研究結(jié)果:
　　1.CD56bright NK數(shù)量變化和治療應(yīng)答狀況相關(guān)
　　我們

3、動(dòng)態(tài)分析和比較干擾素應(yīng)答和不應(yīng)答病人之間NK細(xì)胞比例和絕對(duì)數(shù)量的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)干擾素應(yīng)答的病人在治療的3到12月期間，NK細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量顯著多于干擾素不應(yīng)答的病人。和治療前相比不應(yīng)答病人NK細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量減少，應(yīng)答病人則沒有變化。而且我們還發(fā)現(xiàn)治療過(guò)程中應(yīng)答病人比不應(yīng)答病人出現(xiàn)更高比例的NK細(xì)胞，主要出現(xiàn)在治療中的3月、6月和9月三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，而在不應(yīng)答病人中出現(xiàn)相反的趨勢(shì)，表現(xiàn)為3個(gè)月后開始的NK細(xì)胞比例下調(diào)，一直持續(xù)到治療結(jié)束。進(jìn)一步分

4、析NK細(xì)胞兩個(gè)亞群在干擾素治療過(guò)程中的變化，我們發(fā)現(xiàn)CD56brightNK細(xì)胞的比例和絕對(duì)數(shù)在治療過(guò)程中均有顯著增加，而且在治療過(guò)程中應(yīng)答病人CD56bright NK細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)要顯著多于不應(yīng)答病人。
　　2.在干擾素治療過(guò)程中，應(yīng)答病人NKp30+NK細(xì)胞數(shù)量增加更為顯著
　　我們動(dòng)態(tài)檢測(cè)了NK細(xì)胞的表型變化，我們發(fā)現(xiàn)自然殺傷受體NKp30的表達(dá)隨著干擾素的治療進(jìn)程有非常顯著的增加，尤其是NKp30+ NK細(xì)胞數(shù)量在應(yīng)

5、答病人中顯著多于不應(yīng)答病人，這種趨勢(shì)從治療的第3個(gè)月一直能夠維持到第12個(gè)月，直至治療結(jié)束。但是NKp44，NKp46和NKG2D在應(yīng)答和不應(yīng)答病人中并沒有差異。
　　3.Peg-IFN-α-2b通過(guò)促進(jìn)IL-15的產(chǎn)生間接增強(qiáng)NKp30+NK細(xì)胞的增殖能力
　　我們發(fā)現(xiàn)NKp30+NK細(xì)胞Ki67的表達(dá)水平在干擾素治療后要明顯高于治療前。但是體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單獨(dú)Peg-IFN-α-2b刺激并不能上調(diào)NKp30的表達(dá)，經(jīng)細(xì)胞因子

6、篩查發(fā)現(xiàn)IL-15有此作用，通過(guò)檢測(cè)IL-15受體旺鏈，我們發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞上有高水平的IL-15受體的表達(dá)，而且應(yīng)答病人單核細(xì)胞上IL-15受體的表達(dá)也顯著高于不應(yīng)答病人。
　　4.Peg-IFN-α-2b治療能夠維持NKp30+NK細(xì)胞的抗病毒功能
　　為了進(jìn)一步研究NK細(xì)胞的功能變化，我們檢測(cè)NK細(xì)胞的IFN-γ和CD107a表達(dá)水平，我們發(fā)現(xiàn)多功能IFN-γ+CD107+NK細(xì)胞比例在應(yīng)答病人和不應(yīng)答病人之間有差異。CD

7、107a+NK細(xì)胞比例在應(yīng)答病人中也顯著高于不應(yīng)答病人，提示多功能IFN-γ+CD107+NK細(xì)胞可能有利于慢性乙型肝炎病人對(duì)應(yīng)干擾素的應(yīng)答。為了進(jìn)一步研究NKp30+NK的功能，我們用細(xì)胞因子IL-12刺激應(yīng)答病人和不應(yīng)答病人的外周血單個(gè)核細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)答病人在治療過(guò)程中的6到9月期間有更高比例的NKp30+IFN-γ+NK細(xì)胞。
　　5.應(yīng)答病人在干擾素治療過(guò)程中產(chǎn)生更多表達(dá)CD62L的NKp30+NK細(xì)胞
　　我們檢

8、測(cè)兩個(gè)亞群NK細(xì)胞中NKp30+NK細(xì)胞表達(dá)CD62L的水平，發(fā)現(xiàn)治療結(jié)束后，應(yīng)答病人和不應(yīng)答病人相比CD56brightNKp30+NK細(xì)胞和CD56dimNKp30+NK細(xì)胞都有更高水平CD62L的表達(dá)提示CD62L+NK細(xì)胞是產(chǎn)生IFN-γ的關(guān)鍵NK細(xì)胞。
　　6.Peg-IFN-α-2b上調(diào)NKp30+NK細(xì)胞表面NKG2A的表達(dá)
　　共標(biāo)檢測(cè)NK細(xì)胞表面NKp30和NKG2A發(fā)現(xiàn)不應(yīng)答病人在治療過(guò)程中的第6月，9月

9、，12月有更高比例的NKp30和NKG2A雙陽(yáng)性NK細(xì)胞，并持續(xù)到隨訪階段，與之相反的是，應(yīng)答病人中有更多NKG2A-NKp30+ NK細(xì)胞，體外實(shí)驗(yàn)證明兩群細(xì)胞有功能差異，前者功能較弱，后者功能較強(qiáng)。
　　綜上所述，我們的研究揭示PegqFN-α-2b對(duì)于NK表型和功能有調(diào)控作用，可能是通過(guò)作用于單核細(xì)胞，促進(jìn)其分泌IL-15，進(jìn)而提高NK細(xì)胞的增殖能力，NK細(xì)胞數(shù)量增加，活化性受體NKp30表達(dá)上升，NK細(xì)胞功能活化，介導(dǎo)對(duì)H