食管鱗癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測及臨床意義的研究.pdf

1、背景：
　　食管癌是威脅人類健康的常見惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率和死亡率分別位居惡性腫瘤的第8位和第6位。食管癌的組織類型及發(fā)病情況存在明顯地區(qū)差異：歐美國家以腺癌為主；而在亞洲國家，鱗狀細(xì)胞癌（ esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）占全部病例的90％以上。ESCC患者預(yù)后較差，總的5年生存率不到30%，其中易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的重要原因。傳統(tǒng)的影像學(xué)及腫瘤標(biāo)志物檢查，難

2、以及時發(fā)現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。
　　在腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的過程中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells, CTC）起到了重要的作用，CTC由于某種原因脫離腫瘤原發(fā)灶，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)到達(dá)新組織，并在一定條件下發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶。目前常用的CTC檢測方法主要包括：依賴腫瘤相關(guān)標(biāo)記物檢測的CellSearch系統(tǒng)以及基于形態(tài)學(xué)富集CTC的膜過濾分離腫瘤細(xì)胞技術(shù)（isolation by size of epithelial t

3、umor cells，ISET）。隨著CTC檢測技術(shù)的進(jìn)步，CTC檢測的應(yīng)用成為目前腫瘤學(xué)界的研究熱點(diǎn)。近年來對乳腺癌，肺癌，結(jié)直腸癌等研究證實，CTC是腫瘤患者獨(dú)立預(yù)后因子、靶向治療的標(biāo)志物和靶點(diǎn)，CTC檢測對早期腫瘤風(fēng)險評估、預(yù)后評估、療效監(jiān)測等方面具有重要意義。與其他惡性腫瘤相比，對ESCC患者外周血CTC檢測及其臨床意義的研究較少，在PubMed檢索系統(tǒng)上僅有2篇使用CellSearch系統(tǒng)研究食管癌CTC的文獻(xiàn)報道，而尚無使用

4、ISET技術(shù)在該領(lǐng)域的研究報道。
　　目的：
　　1.使用CellSearch系統(tǒng)及ISET技術(shù)（CTC-Biopsy系統(tǒng)）兩種方法檢測同一組ESCC患者外周血CTC的表達(dá)情況，比較兩種技術(shù)方法的CTC檢測結(jié)果。
　　2.分析CTC檢測結(jié)果與ESCC患者臨床病理特征的關(guān)系，進(jìn)而探討CTC檢測對ESCC診斷治療的臨床指導(dǎo)意義。
　　方法：
　　2014年5月-2014年12月山東省腫瘤醫(yī)院收治的61例病理確診

5、為ESCC的初治患者作為研究對象，同期選擇22例健康志愿者作為對照組。受試者入組前均簽署知情同意書，登記受試者臨床資料。受試者在接受治療前于肘正中靜脈采集空腹血12.5ml，其中7.5ml血樣用于CellSearch系統(tǒng)檢測，5ml血樣用于CTC-Biopsy系統(tǒng)檢測。CTC檢測流程嚴(yán)格按照檢測設(shè)備的操作手冊執(zhí)行。CTC結(jié)果判讀采用雙盲判讀，再經(jīng)第三方復(fù)核以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。
　　采用SPSS17.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

6、兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。以P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.健康志愿者外周血CTC檢測結(jié)果：
　　分別使用CellSearch系統(tǒng)及ISET技術(shù)檢測22例健康志愿者外周血，均未檢測到CTC。
　　2. ESCC患者外周血CTC檢測結(jié)果：
　　1) CellSearch系統(tǒng)檢測61例ESCC患者外周血，在1例IV期患者的外周血中檢測到CT

7、C，總的檢出率為1.6%（1/61）。使用CellSearch系統(tǒng)檢測未能檢測到CTM；
　　2) ISET技術(shù)檢測61例ESCC患者外周血，在20例患者的外周血中檢測到CTC，總的檢出率為32.8%（20/61）；按病理分期I-IV期患者CTC檢出率分別為0.0%（0/4）、30.8％（4/13）、31.4%（11/34）、50.0%（5/10）。在3例患者外周血中檢測到CTM，總檢出率為4.9%（3/61）；按病理分期I-IV

8、期患者CTM檢出率分別為0.0%（0/4）、7.7%（1/13）、2.9%（1/34）、10.0%（1/10）。
　　3. ESCC患者外周血CTC檢測結(jié)果與患者臨床病理特征的相關(guān)性：
　　1) CellSearch系統(tǒng)檢測CTC結(jié)果與ESCC患者年齡、性別、ECOG評分、飲酒史、吸煙史差異，血清CEA檢測結(jié)果，治療前血紅蛋白水平、治療前血小板計數(shù)、粒淋比均不相關(guān)，與病理分期、腫瘤位置、大小、分化程度、侵犯程度，有無脈管侵犯

9、，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均不相關(guān)；
　　2) ISET技術(shù)檢測CTC結(jié)果與ESCC患者病理分期、治療前血小板計數(shù)相關(guān)（P＜0.05），與其他臨床及病理特征均不相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1. CellSearch系統(tǒng)檢測ESCC患者外周血CTC，特異度為100%，但靈敏度低，僅為1.6%（1/61）；ISET技術(shù)檢測ESCC患者外周血CTC，特異度為100%，靈敏度為32.8%（20/61），使用ISET技術(shù)研究ESCC中CT

10、C是可行的。
　　2.造成CellSearch系統(tǒng)與ISET技術(shù)兩種方法檢測ESCC患者外周血CTC檢出率差別較大的原因是其檢測原理不同；其中CellSearch系統(tǒng)檢測CTC檢出率較低的原因還需要進(jìn)一步研究。
　　3.首次報道，使用ISET技術(shù)可以在ESCC患者外周血中檢測到CTM。
　　4. ISET技術(shù)檢測CTC結(jié)果與ESCC患者病理分期、治療前血小板計數(shù)相關(guān)，提示CTC檢測結(jié)果可作為ESCC分期的有益補(bǔ)充，并提