2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:新型免疫調控因子TIPE2(Tumor necrosis factor–alpha-induced protein8-like2)是一種在炎癥反應及免疫自穩(wěn)過程中不可或缺的負性調控因子。先前發(fā)現TIPE2在小鼠體內的下調通常會導致致命性炎癥。隨著研究的進一步深入,有報道稱TIPE2在人體內往往和自身免疫性疾病相關,主要表達于免疫組織和細胞中;在一些非免疫組織及細胞中也發(fā)現有表達,包括肝細胞,神經細胞,以及宮頸、胃腸道的上皮細胞等,

2、提示在人體的非免疫器官及細胞中,TIPE2也可能具有一定的調節(jié)作用。
  目的:闡明TIPE2在HCV感染后誘導腫瘤形成過程中所起的作用及分子機制。
  方法:⑴收集HCV陽性肝癌病人標本,包括癌組織及癌旁組織,利用Western blot比較TIPE2的表達差異。⑵以肝癌細胞系Huh7及正常肝細胞系Changliver為研究對象,分別建立TIPE2過表達及 TIPE2沉默穩(wěn)定株,繼而進行生長曲線描繪、克隆形成實驗、劃痕實驗

3、等檢測TIPE2對肝癌細胞、正常肝細胞的增殖、克隆形成能力及劃痕愈合能力等的影響。⑶將上述建好的穩(wěn)定株對裸鼠進行腋下注射,觀察裸鼠成瘤情況。⑷在293T細胞中將TIPE2分別與HCV編碼蛋白(包括NS3/4A、NS5A、NS5B等)共轉染,48h后Western blot檢測哪個(些)編碼蛋白對TIPE2的表達有影響。⑸在293T細胞中,將上述對TIPE2表達有影響的HCV編碼蛋白與TIPE2共轉染,利用免疫共沉淀和免疫熒光-激光共聚焦

4、檢測TIPE2與這些蛋白的相互作用情況。進一步在Huh7細胞中進行驗證。⑹將裸鼠的瘤組織進行組織切片,檢測DNA損傷情況。⑺利用DNA損傷藥物HU處理TIPE2過表達及TIPE2沉默穩(wěn)定株,然后Western blot檢測過表達、沉默 TIPE2對DNA損傷/修復通路中關鍵蛋白 H2AX、Chk1、Chk2等的磷酸化水平是否有影響。
  結果:①HCV陽性肝癌病人肝組織中TIPE2表達下調。②HCV編碼蛋白NS5A可以促使TIPE

5、2降解。③HCV編碼蛋白NS5A與TIPE2可以相互作用,且在胞漿共定位。④過表達 TIPE2后,DNA損傷/修復通路中的關鍵分子γ-H2AX、pChk1與 pChk2表達明顯下降;沉默TIPE2后,γ-H2AX、pChk1與pChk2表達明顯上升。⑤過表達TIPE2后,細胞增殖速度、克隆形成能力及劃痕愈合能力顯著減弱。沉默TIPE2后,細胞增殖速度、克隆形成能力及劃痕愈合能力顯著增強。⑥裸鼠皮下注射TIPE2過表達及對照組穩(wěn)定株細胞后

6、,過表達組的成瘤能力明顯不及對照組;注射 TIPE2沉默及對照組穩(wěn)定株細胞后,沉默組的成瘤能力高于對照組。⑦檢測上述瘤組織中的DNA損傷情況,發(fā)現TIPE2過表達組未出現陽性著色顆粒,幾乎不存在 DNA損傷,而其相應的對照組中則出現大量陽性顆粒,DNA損傷嚴重;相反,在 TIPE2沉默組其陽性著色顆粒明顯多于對照組,DNA損傷情況較對照組更為嚴重。
  結論:依據上述結果可以得知:TIPE2可以通過調控DNA損傷/修復通路參與 H

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