肝纖維化中吲哚胺2,3-雙加氧酶1的作用機(jī)制及大黃廑蟲(chóng)丸的干預(yù)研究.pdf

1、研究背景:
　　吲哚胺2，3-雙加氧酶1(IDO1)是催化色氨酸分解代謝的限速酶，能夠調(diào)控免疫微環(huán)境。但目前尚未有研究對(duì)IDO1在肝纖維化中的作用機(jī)制進(jìn)行深入探索。中醫(yī)藥在調(diào)節(jié)免疫與防治肝纖維化領(lǐng)域具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，大黃(廑)蟲(chóng)丸臨床上常用于治療各種原因引起的肝纖維化和肝硬化的治療。
　　因此，通過(guò)探索大黃(廑)蟲(chóng)丸抗肝纖維化的免疫微環(huán)境機(jī)制內(nèi)涵及IDO1靶標(biāo)調(diào)控機(jī)制，為肝纖維化有效預(yù)防及調(diào)控尋找新的分子靶點(diǎn)，同時(shí)為肝纖維化預(yù)防

2、藥物開(kāi)發(fā)提供新的思路。
　　研究方法:
　　在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，利用野生型和IDO1基因敲除型小鼠建立四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化模型，并且應(yīng)用IDO1抑制劑、大黃(廑)蟲(chóng)丸及秋水仙堿干預(yù)野生型模型小鼠。造模結(jié)束后，利用Western blot和TUNEL染色觀察各組小鼠肝細(xì)胞損傷凋亡情況;H&E、天狼星紅染色、免疫熒光、ELISA、Western blot和qPCR等方法觀察肝纖維化程度、IDO1相關(guān)蛋白及肝內(nèi)免疫微環(huán)境變

3、化。在臨床試驗(yàn)中，招募健康志愿者及肝硬化患者分別納入對(duì)照組和模型組，用ELISA觀察受試者血清IDO1水平與肝損傷及硬變程度的關(guān)系。
　　結(jié)果采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)分析及Graph Pad Prism6.0作圖，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　研究結(jié)果:
　　首先，IDO1的缺失有著顯著的抗損傷和抗纖維化作用，與野生型模型組比較，IDO1敲除肝纖維化小鼠血清ALT和AST、肝細(xì)胞凋亡率、肝組織膠

4、原生成、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、BAX蛋白的表達(dá)均降低(P＜0.05);肝臟色氨酸2，3-雙加氧酶(TDO)和一般性調(diào)控阻遏蛋白激酶2(GCN2)的表達(dá)增加(P＜0.05);白介素(IL-17a)表達(dá)和下游細(xì)胞因子的mRNA水平降低(P＜0.05)。同時(shí)，在肝纖維化小鼠及肝硬化受試者中發(fā)現(xiàn)血清IDO1水平與肝損傷呈正相關(guān)(P＜0.05);在肝硬化受試者中，血清IDO1水平與肝硬度值亦呈正相關(guān)(P＜0.05)。

5、另外，高劑量大黃(廑)蟲(chóng)丸可以顯著抵抗CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化損傷，且與模型組比較，高劑量大黃(廑)蟲(chóng)丸組小鼠肝組織TDO表達(dá)增加(P＜0.05)，機(jī)體IDO1和肝臟IL-17amRNA水平下降(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　在本研究中，證實(shí)了IDO1基因的缺失減輕了肝臟對(duì)CCl4誘導(dǎo)肝纖維化的易感性，IDO1基因的缺失能代償性地上調(diào)肝臟TDO表達(dá)并降低IL-17a水平，從而影響肝臟炎癥因子的釋放，抑制星狀細(xì)胞的活化，