miR-126調控LIMK-1與卵巢癌細胞侵襲相關的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，具有發(fā)展迅速、惡性程度高、極易發(fā)生局部侵襲和腹腔內轉移的特點，其復發(fā)率和致死率高居婦科惡性腫瘤之首。LIMK-1的主要作用是組裝含肌動蛋白的細胞骨架，在腫瘤細胞的增殖與侵襲中具有重要的作用。miRNA即microRNA，是一類新發(fā)現(xiàn)的內源性小分子非編碼單鏈RNA，長約18～26個核苷酸，具體作用方式取決于靶mRNA的3'末端非翻譯區(qū)堿基互補配對與匹配的程度，最終致靶mR

2、NA降解或轉錄后翻譯受抑，廣泛參與動植物生長發(fā)育、細胞分化、增殖與凋亡以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉移等各種生理及病理過程。通過我們先前的研究發(fā)現(xiàn)miR-126通過調節(jié)VEGF的表達對腫瘤的增殖、侵襲有抑制的作用，然而作為血管內皮生長因子的VEGF如何抑制腫瘤細胞的侵襲的機制目前還不明了，為此，本研究擬構建miR-126的慢病毒表達載體LV-miR-126，并將其轉染上皮性卵巢癌細胞株，明確miR-126對卵巢癌細胞LIMK-1的影響，從而

3、為闡明卵巢癌侵襲的機制以及為抑制卵巢癌的轉移提供一條新的途徑。
　　研究材料和方法
　　培養(yǎng)人卵巢癌細胞株SKOV3，通過慢病毒包裝miR-126轉染卵巢癌SKOV3細胞系，將其分為三組:轉染miR-126表達組（SKOV3/LV3-has-miR-126組）、轉染陰性對照組(SKOV3/LV3NC組)和空白對照組（SKOV3組），通過Transwell侵襲實驗觀察各組細胞的侵襲能力，通過免疫熒光比較各組細胞LIMK-1表達

4、量的差別，分析miR-126與LIMK-1表達的關系。
　　結果:
　　1.Transwell侵襲實驗結果顯示SKOV3細胞侵過基質膠的穿膜細胞數(shù)在SKOV3組細胞中是261±8。與SKOV3組細胞相比較，轉染陰性對照組SKOV3/LV3NC細胞侵過基質膠的穿膜細胞數(shù)沒有明顯改變（276±20，P＞0.05），轉染LV3-has-miR-126組細胞侵過基質膠的穿膜細胞數(shù)明顯減少(232±17，P＜0.05)。
　　2

5、.SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細胞LIMK-1蛋白的表達量相近;與SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細胞LIMK-1蛋白的表達量相比，LV3-has-miR-126組細胞LIMK-1蛋白的表達量明顯減少。
　　結論:
　　1.miR-126轉染的SKOV3卵巢癌細胞侵過基質膠的穿膜細胞數(shù)明顯減少，提示miR-126的表達可抑制卵巢癌的侵襲。
　　2.miR-126轉染的SKOV3卵巢癌細胞LIMK-1