燈盞花素和二氫楊梅素對(duì)高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和NO水平的影響.pdf

1、研究目的：探討燈盞花素和二氫楊梅素對(duì)高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響，初步探討其作用機(jī)制，并進(jìn)一步觀察燈盞花素和二氫楊梅素對(duì)高糖環(huán)境NO水平的影響。 研究方法： CCK-8法檢測(cè)燈盞花素和二氫楊梅素對(duì)HUVEC活性的影響；利用熒光探針DCFH-DA標(biāo)記HUVEC內(nèi)ROS并結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)測(cè)定熒光強(qiáng)度；用硝酸還原酶法測(cè)細(xì)胞上清液中NO3-+NO2-含量來(lái)反映NO水平；用MESACUP@蛋白激酶試劑盒檢測(cè)HU

2、VEC胞漿和胞膜的PKC活性。 研究結(jié)果： 1.不同濃度的燈盞花素或二氫楊梅素(10-9、10-7、10-5M)分別處理HUVEC48小時(shí)及72小時(shí)，與正常細(xì)胞相比，存活率無(wú)顯著性差異。 2.高糖組細(xì)胞ROS較正常對(duì)照組相比增高，而甘露醇對(duì)照組與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。燈盞花素或二氫楊梅素對(duì)照組與正常對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異。與高糖組比，濃度為10-9、10-7、10-5M的燈盞花素或二氫楊梅素干預(yù)組細(xì)胞RO

3、S均降低，與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，且三個(gè)不同濃度藥物干預(yù)組之間均無(wú)顯著性差異。 3.100nM PMA處理正常對(duì)照組細(xì)胞1.5h后，ROS較正常對(duì)照組增高，而燈盞花素或二氫楊梅素均可以完全抑制這種現(xiàn)象，100nM PMA處理燈盞花素或二氫楊梅素干預(yù)組細(xì)胞1.5h后，ROS水平與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。與高糖組相比，100nM PMA處理高糖組細(xì)胞1.5h后刺激ROS增加，而燈盞花素或二氫楊梅素不僅能完全抑制這種現(xiàn)象，還

4、能降低ROS至正常對(duì)照組水平。 4.與正常對(duì)照組細(xì)胞相比較，高糖處理組細(xì)胞胞漿PKC活性(PKCc)增高，胞膜PKC活性(PKCm)明顯增高，且胞膜活性占總活性百分比(PKCm/PKCt)升高。與高糖組比，10-9M燈盞花素干預(yù)組PKCc、PKCm、PKCm/PKCt均降低。而10-9M二氫楊梅素干預(yù)組細(xì)胞的PKCc、PKCm及PKCm/PKCt與高糖組比較均無(wú)顯著性差異。 5.與正常對(duì)照組比較，高糖作用HuVEC48h

5、后，NO水平顯著降低。10-9M燈盞花素對(duì)照組和10-9M二氫楊梅素對(duì)照組細(xì)胞NO水平與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。10-9M燈盞花素干預(yù)組的NO水平較高糖組顯著升高，而10-9M二氫楊梅素干預(yù)組細(xì)胞的NO水平較高糖組略有升高，但與高糖組相比無(wú)顯著性差異。 研究結(jié)論： 1.燈盞花素和二氫楊梅素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的活性均無(wú)明顯影響。 2.燈盞花素和二氫楊梅素均可降低高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激。 3.