遺傳性色素性皮膚病基因突變及相關(guān)致病機(jī)理的研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述：
　　第一部分 全外顯子組測(cè)序技術(shù)對(duì)家族性泛發(fā)性雀斑樣痣致病基因的探索
　　雀斑樣痣在臨床上較常見，表現(xiàn)為大小不一的棕褐色斑點(diǎn)或斑片，可以作為綜合征的皮膚表現(xiàn)出現(xiàn)，也可以作為疾病單獨(dú)出現(xiàn)。家族性泛發(fā)性雀斑樣痣臨床罕見，呈常染色體顯性遺傳，皮疹表現(xiàn)為泛發(fā)全身的雀斑樣痣，而缺乏系統(tǒng)受累的表現(xiàn)，本病相關(guān)致病基因及致病機(jī)理尚不完全明確。全外顯子組測(cè)序技術(shù)自2005年商業(yè)化后即廣泛應(yīng)用于罕見病致病基因的檢測(cè)

2、，具有數(shù)據(jù)量相對(duì)全基因組測(cè)序小而診斷陽(yáng)性率較高的特點(diǎn)。
　　目的:
　　本研究擬通過(guò)全外顯子組測(cè)序技術(shù)探索一例三代3例患者的家族性泛發(fā)性雀斑樣痣家系的未知致病基因，并對(duì)候選致病基因在皮膚組織中的表達(dá)進(jìn)行研究。
　　方法:
　　本研究收集了一個(gè)家族性泛發(fā)性雀斑樣痣家系的臨床資料和家系資料，并繪制家系圖譜。對(duì)家系中2例患者和1例正常對(duì)照進(jìn)行了全外顯子組測(cè)序，重疊2例患者共同的變異，除外正常對(duì)照的良性變異，通過(guò)蛋白功能

3、預(yù)測(cè)和與數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比篩選得到一系列候選致病基因，通過(guò)家系共分離驗(yàn)證得到本病的候選致病基因，在2例散發(fā)的泛發(fā)性雀斑樣痣患者中進(jìn)行該基因的驗(yàn)證，并在200個(gè)隨機(jī)的正常人中篩查是否有檢出的突變。通過(guò)免疫組化、免疫熒光染色和Western Blot明確該致病基因在正常組織和病變組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　EPHB1基因的突變?cè)诙鄠€(gè)蛋白功能預(yù)測(cè)軟件中預(yù)測(cè)有害，在多個(gè)基因數(shù)據(jù)庫(kù)中均無(wú)突變相關(guān)數(shù)據(jù)，且與疾病共分離，在200個(gè)正常人中也未

4、檢測(cè)到該突變，免疫組化，免疫熒光染色和Western Blot均證實(shí)EPHB1基因在患者皮損中的表達(dá)高于正常對(duì)照組。但該突變?cè)贓xAc數(shù)據(jù)庫(kù)中頻率高于疾病發(fā)病率，且在2例散發(fā)的不伴有系統(tǒng)受累的泛發(fā)性雀斑樣痣患者中均未檢出該基因的突變。
　　結(jié)論:
　　EPHB1基因不能明確是家族性泛發(fā)性雀斑樣痣的致病基因，EPHB1基因可能與色素性疾病的發(fā)病相關(guān)。
　　第二部分 基于目標(biāo)區(qū)域捕獲的二代測(cè)序技術(shù)在色素異常癥檢測(cè)中的應(yīng)用<

5、br>　　色素異常癥是一組疾病的統(tǒng)稱，臨床上較為常見，其皮疹表現(xiàn)為同時(shí)出現(xiàn)的色素增加和色素減退斑，一般不伴有系統(tǒng)癥狀。遺傳性對(duì)稱性色素異常癥和遺傳性泛發(fā)性色素異常癥是其中兩種經(jīng)典類型，兩者的臨床和組織病理表現(xiàn)相似，但兩者的致病基因不同，基因診斷在鑒別不典型病例中有一定優(yōu)勢(shì)。基于目標(biāo)區(qū)域捕獲的二代測(cè)序技術(shù)以其低成本，高通量的特點(diǎn)，適用于異質(zhì)性疾病的基因篩查，但關(guān)于其在色素性疾病篩查診斷中的報(bào)道尚較少。
　　目的:
　　本研究擬

6、通過(guò)基于目標(biāo)區(qū)域捕獲的二代測(cè)序技術(shù)，批量檢測(cè)臨床診斷為泛發(fā)性色素異常癥的患者的致病基因，進(jìn)而驗(yàn)證二代測(cè)序技術(shù)在色素性皮膚病基因診斷中的應(yīng)用。
　　方法:
　　本研究收集了臨床診斷為遺傳性泛發(fā)性色素異常癥的7個(gè)家系的8名患者的臨床資料和全血標(biāo)本。因?yàn)檫z傳性對(duì)稱性色素異常和遺傳性泛發(fā)性色素異常皮損容易混淆，將目標(biāo)區(qū)段設(shè)定為ADAR1基因和ABCB6基因，提取患者DNA后通過(guò)超聲打斷，末端修復(fù)，鏈接接頭等完成文庫(kù)制備，通過(guò)Nimb

7、legen序列捕獲芯片完成目標(biāo)區(qū)段的雜交捕獲，并通過(guò)Hiseq2500測(cè)序儀進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，最后通過(guò)信息分析和數(shù)據(jù)解讀獲得突變信息。
　　結(jié)果:
　　在收集到的8例臨床表現(xiàn)為泛發(fā)性色素異常癥的患者中，來(lái)自兩個(gè)家系的3例患者檢出了致病基因突變。本研究總結(jié)了檢出突變的患者的臨床表現(xiàn)及其家系圖。這3例患者都有全身彌漫分布的色素增加和色素減退斑，臨床均診斷為泛發(fā)性色素異常癥，其中1例患者檢出了ABCB6基因的突變(c.1270T＞C)

8、，而另外2例患者檢出了ADAR1基因的突變(c.1325C＞G)。
　　結(jié)論:
　　不典型的遺傳性對(duì)稱性色素異常皮疹可以不局限于四肢末端，也可累及軀干?；谀繕?biāo)捕獲的二代測(cè)序技術(shù)降低了測(cè)序的成本和周期，適用于色素性疾病的臨床檢測(cè)。
　　第三部分 Sanger測(cè)序檢測(cè)5例遺傳性對(duì)稱性色素異常癥患者的致病基因突變
　　遺傳性對(duì)稱性色素異常癥是一種罕見的遺傳性色素性皮膚病。本病表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳，臨床上皮疹表現(xiàn)為以

9、四肢伸側(cè)為主的網(wǎng)狀色素增加和色素減退斑。本病致病基因已知。
　　目的:
　　本研究擬通過(guò)Sanger測(cè)序的方法，檢驗(yàn)臨床收集到的5例遺傳性對(duì)稱性色素異常癥患者的已知致病基因，明確其致病突變。
　　方法:
　　收集患者的臨床及家系資料，采集外周血，提取外周血DNA，PCR擴(kuò)增所有ADAR1基因的外顯子及其側(cè)翼的調(diào)控序列。Sanger法進(jìn)行直接測(cè)序。
　　結(jié)果:
　　在5例臨床診斷遺傳性對(duì)稱性色素異常的家