遺傳性毛發(fā)疾病的致病突變研究.pdf

1、第一部分先天性全身毛發(fā)增多癥中6q22微重復的鑒定
　　先天性全身毛發(fā)增多癥(congenital generalized hypertrichosis，CGH)以非雄激素依賴的全身性毛發(fā)過度生長為主要特征，具有表型異質性及遺傳異質性，臨床上分型較多，不同亞型之間表型有交疊。已發(fā)現(xiàn)的致病改變包括4號、8號、17號、X染色體重排，以及同樣位于17號染色體上的ABCA5基因點突變。
　　本研究收集一例CGH家系。先證者多毛表型接

2、近Ambras型，伴先天性視力不良及脊柱側彎，牙齒自30歲始至完全脫落，其雙親及同胞均表現(xiàn)正常。經知情同意，采集先證者及其母親、所有四名同胞外周血或口腔上皮細胞，提取基因組DNA。微陣列比較基因組雜交(array comparative genomic hybridization，aCGH)分析發(fā)現(xiàn)先證者6q22存在兩個微重復（依次稱為Dup1與Dup2），經實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitive real-time poly

3、merase chain reaction，qPCR)驗證在家系中與疾病表型共分離。隨后進行一系列qPCR縮小兩個微重復邊界范圍，并嘗試多種gap-PCR組合方式最終克隆得到斷裂點。將gap-PCR產物進行Sanger測序，結果顯示兩個微重復邊界彼此相連。結合雙色熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)結果推斷重排后染色體結構。重復區(qū)內STR提示先證者微重復為父源新生重復。
　

4、　此兩個微重復中共包含6個基因，其中GJA1基因為眼齒指發(fā)育不良(ODDD)的致病基因，其拷貝數改變可能是患者眼睛與牙齒表型的原因;RSPO3與RNF146基因的功能與調節(jié)毛囊周期的Wnt通路相關，其拷貝數改變可能單獨或共同導致患者多毛的表型。
　　綜上所述，我們首次在CGH患者中發(fā)現(xiàn)6號染色體上的染色體重排，確定了重排后的染色體結構，并推測兩個微重復為父源新生重復。
　　第二部分Bazex-Dupre-Christol綜合

5、征中Xq26.1微重復的鑒定
　　Bazex-Dupre-Christol綜合征(Bazex-Dupre-Christol syndrome，BDCS)是一種極罕見的遺傳病，其主要臨床表現(xiàn)為一個先天性毛發(fā)稀少、毛囊性皮膚萎縮與早發(fā)性基底細胞癌(basal cell carcinomas，BCCs)的三聯(lián)征。該病表型輕重不一，且易與其他疾病混淆，因此需進行嚴格的鑒別診斷。BDCS呈現(xiàn)明顯的X連鎖顯性遺傳模式，目前定位至Xq25-q2

6、7.1一個11.4Mb的范圍內，但該區(qū)域內12個在毛囊中對細胞增殖分化起重要作用的候選基因中并未檢測到突變。
　　本課題組開展BDCS相關工作初期收集到兩個歐洲BDCS家系，通過全基因組拷貝數變異(copy number variation，CNV)分析，在Xq26.1上發(fā)現(xiàn)一段兩家患者共享的重復區(qū)，并經qPCR驗證在兩個家系中與疾病表型共分離。隨后，通過qPCR、gap-PCR及Sanger測序確定兩家的微重復范圍，其中家系2(

7、F2)精確至堿基水平，并推測了各自的重排機制。
　　為了進一步探究該重復區(qū)域的致病性，本研究收集到另6個歐洲BDCS家系。本研究前期發(fā)現(xiàn)的微重復經qPCR在其余6家患者中均得到驗證，并結合gap-PCR及SNP位點擴增測序的方法作為補充，確認各家微重復在家系內所有成員中均與疾病表型共分離。同時，在215個歐洲無關對照人群，共計354條X染色體中未發(fā)現(xiàn)類似的微重復。隨后，我們確定了新收集6家的微重復范圍，其中F4、F7、F9精確到堿

8、基水平，并推測了各自的重排機制。此外，我們還通過單體型分析，證明8家微重復為獨立發(fā)生。最后，我們構建了Krt15組織特異性過表達的的轉基因小鼠模型，以期進行相關的表型觀察與功能研究，但并未在預期的位置檢測到Igsf1的過表達。
　　綜上，我們提供了充分的證據，從遺傳學層面說明Xq26.1上的微重復很可能是BDCS的致病突變，但其具體致病機制有待進一步研究。
　　第三部分常染色體顯性遺傳性稀毛癥致病突變鑒定
　　遺傳性稀

9、毛癥（hereditary hypotrichosis，HH）是一組臨床上較少見的疾病，既可單獨發(fā)生，也可合并其他表型發(fā)生?；颊咄ǔ３錾鷷r有頭發(fā)，幾個月后開始脫落，具有很強的臨床表型異質性，可為全身受累(generalized)或頭皮受累(scalp-limited)，伴有或不伴有毛干異常，以及毛囊發(fā)育異常等。同時，該病也具很強的遺傳異質性，主要為常染色體顯性(autosomal dominant，AD)與常染色體隱性(autosoma

10、l recessive，AR)。致病基因已知的ADHH按表型可分為三大類，第一類為單純性遺傳性稀毛癥（hereditary hypotrichosis simplex，HSS），其中全身受累型的致病基因APCDD1、RPL21和SNRPE，頭皮受累型為CDSN;第二類為Marie Unna型遺傳性稀毛癥(MarieUnna hereditary hypotrichosis，MUHH)，其中1型的致病基因為U2HR，2型為EPS8L3;第

11、三類位羊毛狀發(fā)(woolly hair，WH)，致病基因為KRT74及KRT71。本研究收集三個ADHH家系(F1、F2、F3)，分別對其進行基因診斷與相關遺傳學研究。
　　在F1中，我們通過等位基因共享分析排除APCDD1、RPL21、CDSN、SNRPE，以及兩個KRT基因簇中的基因作為該家系的致病基因，最終在U2HR基因中檢測到c.82G＞C(D28H)雜合突變作為致病突變，可為該家系后續(xù)的遺傳咨詢及產前基因診斷提供基礎。<

12、br>　　在F2中，我們首先確認了患病的父親攜帶U2HR基因c.2T＞C(M1T)雜合突變;隨后胎兒經Sanger測序并排除母源污染，確認不攜帶此突變，不為患者。
　　在F3中，我們先對先證者進行APCDD1和RPL21基因突變篩查，檢測到RPL21基因c.95G＞A(R32Q)雜合突變，并在全部家系成員中驗證，確認為致病突變。隨后，通過與報道了相同突變的F4和F5共同進行單體型分析，確認三家突變?yōu)楠毩l(fā)生，從而進一步確認RPL2