腫瘤標(biāo)志物的可視化檢測(cè).pdf

1、腫瘤標(biāo)志物（Tumor Marker）是出現(xiàn)在血液和組織中與腫瘤有關(guān)的分子，其檢測(cè)對(duì)腫瘤患者的診斷有重要意義。因此，發(fā)展一種早期靈敏檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的方法對(duì)臨床研究和治療至關(guān)重要。近年來，基于納米材料類過氧化物酶活性的比色生物傳感由于成本低、易于制備和實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)而受到研究者越來越多的關(guān)注，比色生物傳感的關(guān)鍵是將檢測(cè)這一事件轉(zhuǎn)化為顏色的變化并且肉眼可識(shí)別。與生物酶相比，人工模擬酶具有穩(wěn)定的催化活性，耐酸堿和溫度能力強(qiáng)，對(duì)蛋白質(zhì)變性不敏感和生

2、產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。在人工模擬酶中，特別是無機(jī)納米材料模擬生物酶由于其獨(dú)特的大小、形狀、低毒性和高生物相容性等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于比色生物傳感。
　　本論文主要以制備的具有類過氧化物酶活性的納米粒子 Pd-Cu納米粒子和NH2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物為類過氧化物酶敏感材料，采用比色技術(shù)，分別建立了檢測(cè)癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）的比色生物傳感新方法。在過氧化氫存在的條件下，具有類過氧化物酶活性的Pd-Cu納米粒子和N

3、H2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物可以催化辣根過氧化物酶的底物3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）產(chǎn)生顏色反應(yīng)，并且與辣根過氧化物酶相似，Pd-Cu納米粒子和 NH2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物的催化活性依賴于pH、溫度和過氧化氫濃度。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　(1)癌胚抗原（CEA）是結(jié)腸癌的一種特異性標(biāo)志物并被廣泛接受作為結(jié)腸癌診斷附屬物。因此，探索一種簡(jiǎn)單、廉價(jià)、快速、靈敏檢測(cè)血清中 CEA的檢測(cè)方法，對(duì)結(jié)腸癌

4、患者的的臨床診斷有重要意義。本文根據(jù)自己探索的方法合成了介孔狀的Pd-Cu納米粒子，并用透射電鏡（TEM）、X射線衍射譜（XRD）和能量散射X-射線圖譜（EDS）進(jìn)行表征。類過氧化物酶活性研究發(fā)現(xiàn)，制備的Pd-Cu納米粒子可以催化H2O2氧化TMB發(fā)生顯色反應(yīng)，其對(duì)H2O2和TMB的米氏常數(shù)分別為427 mM和0.173 mM，表現(xiàn)出較高親和力，對(duì) H2O2和 TMB的催化常數(shù)分別高于 HRP，其中對(duì)于 TMB的催化常數(shù)是HRP的4.7

5、倍，表明Pd-Cu納米粒子具有較高的催化活性。Pd-Cu納米粒子進(jìn)一步負(fù)載癌胚抗原抗體，以TMB為顯色探針，建立了檢測(cè)CEA的比色生物傳感新方法。在優(yōu)化條件下，線性范圍是0.0005~10.00 ng/mL,最低檢測(cè)限是0.10 pg/mL。此方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、靈敏度高，結(jié)果令人滿意。
　　(2)甲胎蛋白（AFP）是在卵黃囊中產(chǎn)生的血漿蛋白，是在臨床診斷中眾所周知的腫瘤標(biāo)志物。AFP在成人血漿中濃度的上升可以被認(rèn)為是肝細(xì)胞癌

6、或上皮性卵巢腫瘤的標(biāo)志物。因此，發(fā)展一種準(zhǔn)確而靈敏的檢測(cè) AFP的方法對(duì)于臨床研究至關(guān)重要。在這篇文章里，我們通過新型的理化方法合成了有一定大小和形狀的 Pt-Pd-Ru納米枝晶（Nanodendrites）并通過透射電鏡進(jìn)行表征，由于Pt-Pd-Ru納米粒子在水溶液中的分散性差，我們將其負(fù)載到氨基化石墨烯上（NH2-GS），得到NH2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物，制備的這種 NH2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物具有類似于過氧

7、化物酶的高催化活性，我們把這種納米材料應(yīng)用在比色生物傳感中，用于檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白。類過氧化物酶活性研究發(fā)現(xiàn)，制備的NH2-GS@Pt-Pd-Ru納米復(fù)合物可以催化H2O2氧化TMB發(fā)生顯色反應(yīng)，其對(duì)H2O2和TMB的米氏常數(shù)分別為267 mM和0.136 mM，表現(xiàn)出較高親和力，對(duì)H2O2和TMB的催化常數(shù)分別高于HRP，其中對(duì)于TMB的催化常數(shù)是HRP的2.2倍，表明NH2-GS-Pt-Pd-Ru納米粒子具有較高的催化活性。由于