微囊藻毒素-LR對人喉癌細胞Hep2蛋白磷酸酶2A的抑制作用及產(chǎn)生的細胞學影響.pdf

1、研究目的:當今水體富營養(yǎng)化污染以及由此造成的藍藻爆發(fā)已成為人類面臨的首要環(huán)境問題。大量藍藻在水體中生長時產(chǎn)生的許多有毒物質(zhì)微囊藻毒素對水環(huán)境產(chǎn)生了嚴重影響并其對多種生物包括人類都具有威脅。因此，微囊藻毒素的毒性作用機理已然成為研究熱點。微囊藻毒素LR是其中研究較為廣泛，毒性較大的微囊藻毒素。目前認為，微囊藻毒素LR的主要致毒機理是通過抑制蛋白磷酸酶2A的活性從而產(chǎn)生一系列的細胞毒性作用。研究發(fā)現(xiàn)蛋白磷酸酶2A的活性對于腫瘤細胞的生長、增

2、殖、粘附、遷移等都具有重要的作用。實驗室的前期研究主要著眼于MCLR在多種正常細胞系中的致毒效應并獲得了大量信息，也選擇了一種腫瘤細胞進行了初步研究，為進一步探究MCLR對腫瘤細胞的作用，本實驗選取了人喉癌上皮細胞Hep-2作為研究對象。
　　研究方法:應用流式細胞儀、免疫印跡技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)以及細胞增殖實驗、細胞劃痕實驗和Transwell腫瘤細胞遷移實驗來研究不同濃度的MCLR（0.5μM、1μM、5μM和1

3、0μM）處理Hep-2細胞24小時后，產(chǎn)生各種細胞效應以及對PP2A活性的影響方式和相關分子變化。
　　研究結(jié)果:在本實驗的濃度和時間條件作用下，MCLR能夠進入到Hep-2細胞內(nèi)，與PP2A/C亞基共價結(jié)合抑制PP2A活性;MCLR能夠影響PP2A各亞基蛋白水平，如下調(diào)PP2A/A蛋白表達，上調(diào)PP2A/C蛋白表達，略微下調(diào)PP2A/B55α亞基蛋白表達，但對PP2A/B56α亞基蛋白表達影響不明顯;MCLR還會影響PP2A/C

4、的翻譯后修飾水平，上調(diào)PP2A/C亞基Tyr307位點磷酸化水平和Leu309位點的甲基化水平;MCLR能夠?qū)е翲ep-2細胞內(nèi)α4和PP2A/C亞基解離并影響AC核心酶穩(wěn)定性;MCLR還能造成細胞骨架的重構(gòu)以及骨架相關蛋白Tau、Ezrin和VASP磷酸化水平的上升;MCLR能夠引起P38和ERK1/2通路的激活;MCLR能夠促進Hep-2細胞遷移，但是對其細胞周期、細胞凋亡和細胞增殖影響不明顯。
　　研究結(jié)論:MCLR能夠進入