miR-155在ApoE---小鼠頸動脈粥樣硬化中的表達及雷帕霉素的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　目前認(rèn)為頸動脈粥樣硬化是復(fù)雜的炎癥性代謝增生性血管性疾病，是腦血管病發(fā)生的主要發(fā)病機制。動脈粥樣硬化的疾病的發(fā)生和發(fā)展受多種因素的影響，如炎癥細胞的浸潤、高脂因素和細胞自噬等。據(jù)報道m(xù)icroRNAs(miRs)能夠靶向調(diào)控相關(guān)目的蛋白基因，調(diào)控動脈粥樣硬化病理生理的某個階段。已有的研究指出巨噬細胞或腫瘤細胞中的miR-155能夠靶定位于相關(guān)自噬蛋白基因從而調(diào)控自噬的活性,而動脈粥樣硬化斑塊組織中miR-155的表達及

2、其與自噬關(guān)系如何卻很少有報道。因此，我們的研究主要是為了探討miR-155及自噬相關(guān)蛋白基因在ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化中的表達，以及雷帕霉素的干預(yù)作用。
　　方法：
　　將36只8周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機分為對照組，模型組及雷帕霉素組，（每組12只）。對照組給予（右頸總動脈旁套管術(shù)，0.5 mg/kg/d PBS灌胃；模型組給予(右頸總動脈套管術(shù)，0.5 mg/kg/d PBS灌胃)，雷帕霉素組給予(右頸總動脈

3、套管術(shù)，0.5 mg/kg/d雷帕霉素灌胃）,所有小鼠給予西方飲食（0.25%膽固醇+15%脂肪），自由飲水8周。術(shù)后8周末處死三組小鼠,并檢測小鼠血漿中總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白膽固醇脂（LDL-c）和高密度脂蛋白膽固醇脂（HDL-c）的相應(yīng)含量及表達水平；蘇木精伊紅(HE)染色觀察小鼠頸動脈斑塊面積/管腔面積的大小，透射電鏡(TEM)觀察小鼠頸動脈斑塊處細胞超微結(jié)構(gòu)的改變；實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢

4、測斑塊內(nèi) miR-155水平及微管相關(guān)蛋白輕鏈（LC3-Ⅱ）mRNA水平的表達；蛋白印記（western blot）檢測p-mTOR, mTOR及自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　與對照組比較，模型組中血漿TC、TG、LDL-c水平升高（P＜0.05），HDL-c水平升高（P＞0.05）；HE染色顯示頸動脈血管斑塊面積減少，動脈血管粥樣硬化程度加重；透射電鏡下觀察到頸動脈斑塊處細胞中自噬體數(shù)目少量增多；模型

5、組miR-155水平和LC3-Ⅱ的mRNA水平表達上調(diào)（P＜0.05）；p-mTOR/mTOR水平表達下降（P＜0.05）。與模型組比較，雷帕霉素組血漿 TC、TG及 LDL-c水平明顯降低（P＜0.05），HDL-c水平升高（P＞0.05）；HE染色顯示頸動脈血管斑塊面積明顯減少，動脈血管粥樣硬化程度明顯減輕；透射電鏡下觀察到頸動脈斑塊處細胞中自噬體數(shù)目明顯增多,miR-155水平和 LC3-Ⅱ的水平表達明顯上調(diào)（P＜0.05）；p-

6、mTOR/mTOR水平表達明顯下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　我們的研究表明，在ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化發(fā)展的早期階段，有效激活自噬能夠減緩ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展；此外，我們的結(jié)果進一步發(fā)現(xiàn)：在ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化發(fā)展的早期階段，雷帕霉素不僅能夠激活A(yù)poE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化中的自噬，而且發(fā)現(xiàn)，在ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化發(fā)展的早期階段，應(yīng)用雷帕霉素干預(yù)后，miR-1