白頭翁總皂苷堿水解產(chǎn)物的抗腫瘤作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：前期工作提示白頭翁總皂苷具有明顯的體內(nèi)外抗腫瘤作用，其堿水解產(chǎn)物體外抗腫瘤作用優(yōu)于白頭翁總皂苷。本論文將系統(tǒng)探討白頭翁總皂苷堿水解產(chǎn)物（PAHS）的抗腫瘤作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：采用HPLC-ELSD法對(duì)PAHS中8種含量較高的皂苷進(jìn)行測(cè)定；采用MTT及集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白頭翁總皂苷堿水解產(chǎn)物對(duì)人肝癌SMMC-7721以及人肺癌A549的增殖抑制作用，同時(shí)采用Giemsa染色觀察PAHS對(duì)腫瘤細(xì)胞形態(tài)的改變；在體內(nèi)，建

2、立小鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22、C57小鼠Lewis肺癌模型，取荷瘤小鼠血液進(jìn)行血液檢查并對(duì)小鼠腫瘤組織進(jìn)行病理檢查；在機(jī)制方面，采用hoechest33342染色觀察SMMC-7721凋亡細(xì)胞形態(tài)變化；通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)PAHS對(duì)7721及A549細(xì)胞凋亡及周期的影響；采用western blot法檢測(cè)線粒體通路和PI3K通路內(nèi)重要信號(hào)分子的表達(dá)。
　　結(jié)果：HPLC結(jié)果表明，白頭翁總皂苷堿水解產(chǎn)物中8種皂苷單體（白頭翁皂苷

3、D、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、白頭翁皂苷、hederacolchiside A1、白頭翁皂苷F、齊墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齊墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉）含量的總和超過(guò)85%；MTT及集落形成實(shí)驗(yàn)表明P

4、AHS(0.80-25.00μg/ml)可以時(shí)間和劑量依賴性的抑制SMMC-7721及A549細(xì)胞的增殖，抑制7721細(xì)胞集落的形成；體內(nèi)試驗(yàn)表明白頭翁總皂苷堿水解產(chǎn)物(50，100，200mg/kg)可以抑制小鼠肉瘤，小鼠肝癌及肺癌的生長(zhǎng)且具有劑量依賴性，在給藥劑量200mg/kg時(shí)三種模型的抑制率分別達(dá)到49.8%、43.7%、70.6%，HE染色表明PAHS組(50，100，200mg/kg)小鼠腫瘤組織均有大面積壞死及凋亡細(xì)胞的

5、出現(xiàn)。電鏡切片檢查發(fā)現(xiàn)，荷肝癌小鼠及荷Lewis肺癌小鼠腫瘤組織均出現(xiàn)染色質(zhì)集聚成團(tuán)、邊集等明顯細(xì)胞凋亡特征;與CTX組相比，PAHS處理組小鼠的脾系數(shù)、胸腺系數(shù)均有提高，提示PAHS的免疫抑制作用較小。機(jī)制研究表明，PAHS(6.25，12.50，25.00μg/ml)可以誘導(dǎo)SMMC-7721及A549細(xì)胞凋亡，同時(shí)可以將SMMC-7721細(xì)胞周期阻滯在S期，將A549細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯在G0/G1期。western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明