細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因在人大隱靜脈與胸廓內(nèi)動(dòng)脈之間的差異表達(dá).pdf

1、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)是目前治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CAD)的主要方法之一；然而，術(shù)后移植血管橋可能發(fā)生再次狹窄，成為影響手術(shù)效果的重要因素。再狹窄的病理過(guò)程有眾多因素參與，其中橋血管中膜平滑肌細(xì)胞(VSMCs)發(fā)生表型轉(zhuǎn)換、增生后，遷移至內(nèi)膜下是這一過(guò)程中的關(guān)鍵。目前，胸廓內(nèi)動(dòng)脈(ITA)以及大隱靜脈(SV)仍然是手術(shù)中最常用的橋血管材料，然而據(jù)長(zhǎng)期臨床隨訪發(fā)現(xiàn)，二者的通暢率存在著顯著差別，這顯然影響了CABG的長(zhǎng)期手術(shù)

2、效果；其發(fā)生機(jī)制可能與動(dòng)、靜脈中膜平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)、基因表達(dá)及對(duì)刺激因素的應(yīng)答反應(yīng)等存在差異有密切關(guān)系。近期相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)VSMCs的基因表達(dá)及影響因子等方面的研究報(bào)道較多，但有關(guān)動(dòng)、靜脈VSMCs基因差異表達(dá)的研究國(guó)內(nèi)仍未見(jiàn)報(bào)道，國(guó)外的相關(guān)報(bào)道也極少。為此本課題組采用全基因組芯片技術(shù)對(duì)人類SV和ITA VSMCs基因的差異表達(dá)進(jìn)行了前期研究，首次揭示了SV和ITA VSMCs差異基因全貌。既往研究表明細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)基因可能作為影響VS

3、MCs遷移重要因素，而在CABG術(shù)后血管橋再狹窄病理過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用；我們通過(guò)對(duì)前期研究結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析，同樣發(fā)現(xiàn)SV和ITA VSMCs的ECM相關(guān)基因也呈明顯上調(diào)或下調(diào)。因此，以基因芯片為基礎(chǔ)，結(jié)合既往研究，本實(shí)驗(yàn)篩選出11個(gè)在SV VSMCs中表達(dá)上調(diào)的基因(MMP3、MMP9、TIMP3、TNC、FN1、THBS、FBLN、WNT5A、SGCD、COL4A4、COL11A1)；3個(gè)表達(dá)下調(diào)的基因(PLAT、ELN、C

4、OL14A1)作為研究的對(duì)象，擬應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)基因芯片的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，旨在進(jìn)一步說(shuō)明ECM相關(guān)基因?qū)SMCs遷移的影響以及在再狹窄的病理過(guò)程中的重要作用。
　　 內(nèi)容與方法：取本課題組培養(yǎng)的VSMCs提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證上述14種ECM基因在SV、ITA VSMCs間的差異表達(dá)；進(jìn)一步收集冠脈搭橋術(shù)中剩余的SV、ITA血管組織，取血管中膜液氮破碎后提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄后

5、同樣使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證PLAT在SV、ITA間的差異表達(dá)。
　　 結(jié)果：與ITA VSMCs相比，SV中MMP3、MMP9、TIMP3、TNC、FN1、SGCD、COLAA4、THBS、FBLN、COL11A1及WNT5A呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)；PLAT、ELN及COL14A1呈下調(diào)表達(dá)。進(jìn)一步在血管中膜組織提取的RNA中驗(yàn)證，顯示PLAT在SV VSMCs中呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，并且與ITA VSMCs相比這種差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜.

6、05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與基因芯片結(jié)果基本吻合。
　　 結(jié)論：ECM相關(guān)基因在SV，ITA平滑肌細(xì)胞RNA水平上存在差異表達(dá)。與ITA相比，SVVSMCs分化程度較高；促進(jìn)遷移的基因上調(diào)，同時(shí)抑制遷移的基因也上調(diào)，二者在較高的層次上維持平衡，說(shuō)明SV VSMCs有較強(qiáng)的潛在遷移能力，在致病因素下這種平衡一旦打破可以導(dǎo)致病理過(guò)程的迅速進(jìn)展；此外SV血管壁的損傷保護(hù)功能較弱。提示ECM相關(guān)基因的差異表達(dá)可能與術(shù)后SV中膜VSMCs遷移能力