重金屬汞螯合物單克隆抗體制備及其ELISA檢測(cè)初步研究.pdf

1、汞是全球性污染的高毒性元素之一，在環(huán)境和生物體中可以長(zhǎng)期積累并不可降解。無機(jī)汞可以造成人類精神障礙等疾病，烷基化的汞也具有特殊的神經(jīng)毒性，甲基汞對(duì)成人大腦具有極大的傷害，汞還可以通過影響激素代謝從而導(dǎo)致高血壓。目前，汞的檢測(cè)方法主要還是依靠傳統(tǒng)的檢測(cè)儀器，包括冷原子吸收光譜分析法（CV-AAS）與電感耦合等離子發(fā)射光譜分析（ICP-AES）等，這些方法具有費(fèi)用高、處理量有限、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等缺陷，而免疫檢測(cè)的方法檢測(cè)快速、費(fèi)用低廉、靈敏度高

2、和選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，近年來受到國(guó)內(nèi)外廣泛的關(guān)注。
　　 分別制備免疫原Hg-ITCBE-KLH與包被抗原Hg-ITCBE-BSA及ITCBE-BSA，經(jīng)過超濾純化后，三硝基苯磺酸法（TNBS）測(cè)三種抗原中ε-NH2被半抗原替換的程度依次為34．75±4．60％、40．61±0．99％、61．27±0．69％，冷原子吸收光譜分析法檢測(cè)抗原中汞離子的含量依次為38．4±0．5μg/mL、125．5±0．9μg/mL、0μg/mL，各種

3、抗原與載體蛋白的紫外吸收光譜的特征均不相同，SDS-PAGE結(jié)果顯示免疫原與包被抗原的分子量均高于各自的載體蛋白。
　　 以Hg-ITCBE-KLH免疫BALB/C小鼠，采用間接ELISA檢測(cè)效價(jià)，三次免疫后，取免疫后小鼠的脾細(xì)胞與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合制備雜交瘤，用Hg-ITCBE-BSA與ITCBE-BSA做包被抗原，篩選融合后能正常生長(zhǎng)的細(xì)胞株，利用有限稀釋法進(jìn)行2次陽性克隆。獲得一株穩(wěn)定分泌抗汞螯合物雜交瘤細(xì)胞株3C9

4、G12。其腹水效價(jià)達(dá)到5×10-3，親和常數(shù)5．63×109L/moL，單抗亞類為IgM、K型，分子量約為900kDa。特異性實(shí)驗(yàn)表明，與其他金屬離子（pb2+，Cd2+，Cu2+，F(xiàn)e2+，Ca2+，Mn2+，Zn2+，Mg2+，K+，Na+）均無明顯較差反應(yīng)，具有較高的特異性。本研究成功制備了高親和力和高特異性的單克隆抗體，為環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品中殘留汞的快速免疫檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。
　　 利用mAb3C9G12與Hg-ITCBE-BS