大黃素衍生物對T淋巴細胞白血病Molt-4細胞株及耐阿霉素Molt-4-ADR細胞株的作用及機制研究.pdf

1、目的：1、研究大黃素衍生物E19和大黃素衍生物E26對人T淋巴細胞白血病Molt-4細胞株及耐阿霉素Molt-4/ADR細胞株的細胞增殖和凋亡的影響。2、觀察大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR細胞株后，細胞增殖、凋亡、耐藥相關蛋白的變化情況。3、觀察大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR細胞株后，PI3K/AKT、MAPK信號通路相關蛋白變化情況。
　　方法：1、細胞增殖的檢

2、測選用MTT法、細胞克隆形成實驗。應用MTT法觀察藥物作用后細胞生長曲線的變化情況；觀察藥物作用細胞后，細胞克隆數的增長情況。2、細胞凋亡的檢測選用DAPI染色法、DNA片段化檢測。觀察藥物作用細胞后，熒光顯微鏡下染色后的細胞形態(tài)的變化。觀察藥物作用細胞后，DNA片段的影像變化。3、藥物作用細胞后，細胞凋亡相關蛋白如bcl-2、procaspase-3、PARP等，耐藥相關蛋白Pgp，以及PI3K/AKT、MAPK通路相關蛋白的表達變化

3、情況，使用蛋白印跡法來檢測。
　　結果：1、應用MTT法可觀察到，選用不同濃度及作用不同時間的大黃素衍生物E19、E26，作用于Molt-4、Molt-4/ADR細胞，可以顯著抑制細胞株的增殖，表現為濃度和時間的依賴性。其中，對Molt-4、Molt-4/ADR細胞，E19的48h的半數抑制濃度（IC50）分別為1.199±0.204μmol/L和15.60±1.082μmol/L，E26的IC50分別為1.390±0.152μm

4、ol/L和8.564±0.546μmol/L，2、細胞集落形成實驗可以觀察到，不同濃度大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細胞后，隨著藥物濃度的增加，細胞集落的形成數目逐漸減少，有顯著的抑制作用。3、不同濃度大黃素衍生物作用細胞后，通過DAPI染色法，在熒光顯微鏡下可以觀察到凋亡細胞的典型形態(tài)改變。4、不同濃度大黃素衍生物作用細胞后，通過細胞DNA片段化檢測方法，可以觀察到典型的DNA降解條帶。5、不同濃度大

5、黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細胞48h后procaspase-8、4EBP1、P70蛋白表達無明顯變化趨勢，bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP、c-myc、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、MAPK、p-MAPK、p-P70、p-4EBP1蛋白表達較對照組明顯下調，呈濃度依賴性，耐藥相關蛋白Pgp在Molt-4/ADR細胞中表達，不隨藥物作用濃度而變化。大

6、黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細胞不同時間后procaspase-8、MAPK、4EBP1、P70蛋白表達無明顯變化趨勢，bcl-2，c-myc、p-MAPK、p-P70、procaspase-9，procaspase-3、PARP、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表達較對照組明顯下調，呈時間依賴性，耐藥相關蛋白Pgp在Molt-4/ADR細胞中表達，不隨藥物作用時間而變化。